肿瘤相关成纤维细胞分泌的CLIC3促进食管鳞癌侵袭和转移机制研究

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) play an important role in the development of esophageal squamous cell carcinoma(ESCC), but the mechanism is not fully understood. We have previously found that the positive expression of chloride channel protein 3 (CLIC3) in stromal cells of ESCC was closely related to lymph node metastasis of ESCC. In vitro experiments，we have revealed that CLIC3 secreted by CAFs could enhance the invasion and migration of esophageal squamous carcinoma cells. We propose that CAFs may promote invasion and metastasis of ESCC by secreting CLIC3. We will firstly demonstrate that CLIC3 secreted by CAFs can promote the invasion and metastasis of esophageal squamous carcinoma cells in vitro and in vivo experiments. Secondly, we will estimate the role of β-PIX in CLIC3 promoting invasion and metastasis of esophageal squamous carcinoma cells. Finally, RT-PCR and Western-blot will be used to screen for changes in Rac1 and its downstream signaling pathways caused by β-PIX, and blockers or agonists will be used to clarify the specific signaling pathways. Through the above studies, we will demonstrate the role of CLIC3 in promoting invasion and migration of ESCC, and provide a theoretical basis for a new molecular marker and intervention target for the diagnosis and treatment of ESCC.

肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）在食管鳞癌发生发展中起着重要作用，但其机制尚不明确。我们前期发现食管鳞癌间质细胞中氯离子通道蛋白3（CLIC3）阳性表达和食管鳞癌淋巴结转移密切相关；体外实验揭示CAFs分泌的CLIC3可以促进食管鳞癌细胞的侵袭和迁移。基于此，我们提出CAFs可能通过分泌CLIC3促进食管鳞癌侵袭和转移。本课题将首先在食管鳞癌细胞系和动物模型中明确CAFs分泌的CLIC3可以促进食管鳞癌细胞的侵袭和迁移；其次在体外实验中明确β-PIX是CLIC3促进食管鳞癌细胞侵袭和迁移的关键分子；最后利用RT-PCR和Western-blot等技术筛选β-PIX引起的Rac1及其下游信号通路的变化，并利用相应的阻断剂和激动剂明确具体的信号通路。通过以上研究，我们将阐明CLIC3促进食管鳞癌侵袭和转移的作用机制，为食管鳞癌诊疗提供新的分子标志物和干预靶点奠定理论依据。

肿瘤相关成纤维细胞在食管鳞癌发生发展中起着重要作用，但其机制尚不完全明确。氯离子通道蛋白3 （CLIC3）被认为不仅仅具有离子通道特性，也可以分泌蛋白的形式存在。CLIC3在不同的肿瘤中的表达差异较大。即使是同一癌种，不同细胞系中的CLIC3的表达和作用也不尽相同。基于此，本研究首先筛选了高表达CLIC3的肿瘤相关成纤维细胞原代细胞，利用慢病毒敲低技术、免疫共沉淀技术探究高表达CLIC3的CAFs敲低以后对食管鳞癌细胞EC9706的迁移和侵袭的影响，以及 CLIC3和β-PIX的蛋白结合；利用Rac1抑制剂探究了Rac1在EC9706迁移和侵袭中的作用；分析不同食管鳞癌细胞系中CLIC3的表达及对肿瘤生物学行为的影响；利用免疫组化分析食管鳞癌间质细胞中CLIC3表达和食管鳞癌的关系等。研究结果显示高表达CLIC3的CAFs可以促进EC9706的迁移和侵袭，敲低CLIC3以后，CAFs对EC9706的迁移和侵袭影响减弱；CLIC3和β-PIX存在相互结合；而作为β-PIX下游通路的Rac1受到抑制后，食管鳞癌细胞侵袭和迁移作用减弱。以上实验说明高表达CLIC3的CAFs可以促进食管鳞癌细胞系EC9706的迁移和侵袭，而β-PIX/Rac1可能在其中发挥一定的作用。另外不同食管鳞癌细胞系中CLIC3的表达不同，CLIC3在其他食管鳞癌细胞中的作用有待进一步研究。综上，CLIC3在食管鳞癌迁移和侵袭中发挥中一定作用，值得进一步研究。