HMGB1介导自噬对鼻咽癌放射敏感性的影响及机制研究

放射抗拒是鼻咽癌局部复发及远地转移的根本原因。我们前期研究发现HMGB1高表达预示鼻咽癌患者预后不良且导致鼻咽癌放射敏感性降低。那么HMGB1导致鼻咽癌放射抗拒的机制是什么？我们初步研究表明射线照射导致鼻咽癌细胞HMGB1定位改变和自噬水平增加。因此，我们推测HMGB1可能通过定位改变介导放疗诱发自噬最终导致鼻咽癌放射抗拒。为此，我们首先探讨鼻咽癌患者组织及血标本中HMGB1表达，初步验证HMGB1对鼻咽癌放疗敏感性的影响及与鼻咽癌病人预后的相关性。进一步运用免疫荧光、蛋白印迹等实验证明自噬是HMGB1介导鼻咽癌放射抗拒的主要原因。最后通过CO-IP等技术从机制方面进一步阐述HMGB1介导鼻咽癌放射抗拒的途径。本项研究将阐明HMGB1介导放疗诱发自噬导致鼻咽癌放射抗拒及相关机制，进一步为鼻咽癌的预后判断及分子靶向治疗提供新的依据，为鼻咽癌临床放射治疗寻找放疗增敏新的靶标。

鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma , NPC）增殖、转移相关机制研究利于寻找NPC诊断标记和治疗靶标，对改善鼻咽癌的预后尤为重要。我们前期研究发现HMGB1表达与患者T分期和M分期密切相关，且其高表达组NPC患者预后明显差于低表达组。本研究拟进一步探讨其生物学功能及初步作用机制，为鼻咽癌的诊治提供新思路。主要结果如下：（1）通过体外增殖实验及相关机制探讨发现HMGB1促进鼻咽癌C666-1细胞增殖，且这一作用可能通过活化STAT3信号通路，上调 cyclin D1和CDK6 表达促进鼻咽癌细胞快速由G1期进入S期所介导。（2）体外迁移及侵袭实验表明HMGB1增加鼻咽癌C666-1细胞迁移和侵袭能力，这一作用通过上调MMP2蛋白所介导。（3）在对HMGB1调控基因的筛查中发现其调控功能基因UBE2T表达, 通过IHC方法检测UBE2T在149例鼻咽癌标本中的表达，发现其在癌组织中高表达，而在癌旁组织中不表达或低表达，且癌组织中UBE2T的表达与鼻咽癌患者T分期、M分期及颅底侵犯，生存分析及COX多因素分析表明癌组织中UBE2T高表达患者预后差，且UBE2T高表达可作为预测鼻咽癌不良预后独立风险的因素。（4）体内外肿瘤增殖实验结果表明UBE2T过表达促进鼻咽癌增殖及克隆形成，干扰UBE2T抑制鼻咽癌细胞增殖能力。（5）侵袭实验发现UBE2T过表达促进鼻咽癌细胞迁移、侵袭及转移，干扰UBE2T则抑制鼻咽癌细胞迁移及侵袭能力。（6）对UBE2T促增殖及侵袭、转移的机制探讨表明：UBE2T过表达活化AKT/GSK3β/β-catenin信号通路，促进β-catenin核转位及其下游增殖及侵袭、转移相关靶基因表达；应用Akt特异性抑制剂可阻断UBE2T在鼻咽癌中的促迁移、侵袭作用，及促AKT/GSK3β/β-catenin信号通路的活化作用；对20例临床样本IHC分析亦表明UBE2T与p-GSK3β表达存在共定位且表达水平正相关。以上实验充分证明UBE2T主要通过激活Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路从而调节鼻咽癌细胞增殖，侵袭、转移。本课题主要阐述了HMGB1及其调控基因UBE2T在鼻咽癌发生发展中作用及其分子机制，为鼻咽癌的早期预警、预后判断及靶向治疗提供理论依据。