健脾通络解毒法调控COX-2信号通路对慢性萎缩性胃炎癌前病变细胞凋亡及增殖的影响机制研究

慢性萎缩性胃炎癌前病变（PLGC）的防治是胃癌二级预防的重点。前期研究表明健脾通络解毒是本病的有效治法，有必要对该法的作用机制进行深入研究。.本课题以健脾通络解毒法对60例PLGC患者干预治疗6个月，应用原位末端标记法、免疫组化法、RT-PCR法等技术，检测治疗前后COX-2基因表达及其蛋白，凋亡信号通路相关基因表达蛋白（Bcl-2、Survivin等）指标；观察治疗前后组织病理及电镜超微结构；动态记录患者证候相关因素；利用多元回归分析及复杂网络分析方法，分析证候相关因素与COX-2信号传导通路、细胞凋亡及增殖指标间的相关性。揭示健脾通络解毒法调控COX-2信号通路相关基因表达对PLGC细胞凋亡及增殖的影响机制，对深入PLGC治法理论，提高中医药防治胃癌前病变水平具有重要意义。

本研究基于慢性萎缩性胃炎(CAG)及胃癌前病变(PLGC)“脾虚毒损络阻”基本病机，采用健脾通络解毒法对65例PLGC患者进行临床干预治疗6个月，观察分析其治疗前后临床疗效。并应用现代分子蛋白实验方法，检测治疗前后COX-2转导通路相关基因、蛋白表达及细胞凋亡指数（AI）的变化。从而揭示健脾通络解毒法干预PLGC病变及调控细胞凋亡的作用机制。结果如下：.1.临床疗效及病理组织学研究.采用健脾通络解毒方加减辨治PLGC患者，可显著改善主要、次要临床症状；该法对胃镜下各征象有一定改善作用；对胃黏膜异型增生（Dys）、炎症（慢性炎症、活动性）、腺体萎缩、肠上皮化生（IM）等病理改变疗效较好，尤对Dys及慢性炎症疗效更好。临床总有效率为78.45%。.2.作用机制的基础实验研究.①经透射电镜观察，该法可改善胃黏膜上皮超微结构变化而影响PLGC病变进程。.②应用TUNEL荧光标记法观测胃黏膜上皮AI变化。疗后患者AI较疗前增加（P=0.046），表明该法可能通过促进胃黏膜上皮细胞凋亡而改善PLGC病变。.③应用免疫组化检测COX-2、NF-κB、Bcl-2、Bax、Fas、Akt、Survivin及Cyclin E的阳性表达。疗后COX-2、NF-κB、Bcl-2、Akt、Fas蛋白表达趋势明显减弱（P＜0.001）；而Bax蛋白疗后表达趋势增强（P=0.016）。提示该法可通过上述蛋白表达调控PLGC胃黏膜上皮细胞凋亡及病理学变化。.④应用RT-PCR检测Bcl-2、COX-2 mRNA表达。疗后Bcl-2、COX-2 mRNA表达均较前明显减弱（P=0.001、P=0.019）。治疗前后二者mRNA表达趋势与各蛋白表达趋势相一致。.⑤该法可以通过NF-κB/COX-2、COX-2/Bcl-2、COX-2/Akt等转导网络调控细胞凋亡，从而实现对PLGC的干预。.⑥研究提示，NF-κB、COX-2蛋白表达与胃黏膜炎症密切相关，该法可通过NF-κB/COX-2通路来调控、修复PLGC胃黏膜上皮炎症损伤。.⑦证候因素“毒”与COX-2 mRNA、蛋白表达具有明显相关性（P=0.008、P=0.044），COX-2蛋白表达又与胃黏膜炎症密切相关。推断“毒”应与胃黏膜炎症损伤密切相关，“毒损胃络”是胃黏膜炎症损伤的关键病机。