高血压所致血脑屏障紧密连接破坏在脑白质病变发病机制中的作用研究

脑白质病变在老年人和高血压患者中发生率很高，目前被认为可以增加脑卒中、血管性事件死亡、痴呆、步态失用和抗凝、抗血小板药物治疗过程中脑出血的发生率，严重影响老年人的生活质量。脑白质病变的防治困难，原因在于发病机制不明。高血压是其发生的主要危险因素，但具体机制不明。目前认为脑白质病变的发病与脑白质缺血和血脑屏障破坏有关。本研究拟应用高血压性脑白质损害的大鼠模型，在大鼠脑白质病变及其周围，通过透射电镜观察紧密连接的完整性，免疫荧光检测脑组织中血浆蛋白的渗出情况，神经纤维及髓鞘染色观察神经纤维损害，明确紧密连接破坏在脑白质病变发病过程中的作用。同时Western Blot检测脑组织中高血压后不同时间Claudin-5，Zo-1的表达，探讨紧密连接破坏促进高血压性脑白质损害的机制。并通过病毒转染Claudin-5基因观察增加Claudin-5表达对脑白质的保护作用。为寻找新的防治方法奠定基础。

本研究共选择雄性SD大鼠90只，随机分为假手术组（n=15）和RHRSP组(n=75)，定期监测血压，分别在4周、8周、12周、20周、30周处死大鼠，进行WML分级，Loyez染色观察神经纤维改变，免疫荧光检测脑组织白蛋白漏出，透射电镜观察白质区域血脑屏障超微结构，western blotting测定紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin的表达水平。结果发现与假手术组相比模型组血压明显增高（P＜0.05），术后4周、8周明显（P＜0.01）,12周后血压趋于平稳。WML分级WML逐渐加重，胼胝体病变最明显，模型组术后4周、8周、12周、20周、30周分级依次为（0.4±0.2）、（0.8±0.2）、（1.4±0.2）、（2.2±0.2）、（2.6±0.2）。Loyez神经纤维染色发现在RHRSP8周时出现神经纤维紊乱，12周可见脑白质空泡形成，20周可见明显的脑白质疏松，30周进一步加重出现神经纤维紊乱、白质空泡形成，明显的白质疏松。脑白质白蛋白漏出在RHRSP12周前脑实质及血管周围未见明显血浆白蛋白漏出，20周可见血管周围白蛋白漏出，30周可见颗粒状白蛋白漏出到脑实质内，白质区域以胼胝体及尾核漏出最明显。透射电镜检测发现RHRSP4周及8周紧密连接无明显变化，12周时27个中有8个、20周时24个中9个、30周时20个中有11个破坏。与假手术组比较，RHRSP组ZO-1，occludin表达随时间延长逐渐下降（P<0.05）；模型组术后各时间点间均较术前明显减少（P均<0.05）。通过以上结果，得出在RHRSP可以发现脑白质疏松的病理改变，病变最明显的部位在胼胝体。该模型可用于研究WML的病理和发病机制，其慢性进行性高血压诱发脑白质病变的过程更接近人类病理生理，且减少了遗传因素的影响。长期高血压可能通过减少紧密连接相关蛋白ZO-1,occludin表达，造成紧密连接断裂，从而损坏血脑屏障；血脑屏障损坏引起血浆物质如白蛋白漏出，造成神经毒性，引起WML，可能是WML发病机制之一。.目前已经发表中文论著两篇，英文摘要三篇被Vascog2013大会接受为壁报交流，另有一篇摘要在2011年欧洲卒中会议上被选为壁报交流。英文论著有三篇已投稿，尚在审稿过程中。已培养一名全日制硕士毕业，三名全日制硕士在读，三名同等学历硕士在读。