锌指蛋白A20在诱导炎症性肠病粘膜固有层树突状细胞免疫耐受中的作用及机制研究

Inflammatory bowel disease,one kind of autoimmune disease,dues to dysfunction of the body's immune system leading to immune cells and cytokines attacks its own intestinal mucosa and other body tissues and organs. DC acts as the initiator and regulator of the immune system.It have been demonstrated that A20 is a central gatekeeper in inflammation and immunity . Mice genetically deficient in A20 specifically in intestinal epithelial cells or dendritic cells developed colitis. Our previous experiments demonstrated that there is an excessive inflammatory response but insufficient up-regulation of A20 expression in IBD patients.Given the critical roles of A20 and DC in immune homeostasis, and on the basis of our preliminary studies, this project intents to further explor (1)The expression of A20 of lamina Propria dendritic cells in inflammatory bowel disease. (2)To explore if increased or decrease the expression of A20 would influence the maturation of DC,the pathogen recognition receptors and signal transduction.(3)To explore the role of A20 on the stimulation ability of DC to allo-genetic T cells proliferation and TH1/TH2 balance.So as to further clarify the pathogenesis of IBD, and to provide new ideas and targets in the clinical treatment of IBD.

炎症性肠病(Inflammatory Bowel Disease,IBD)是一种自身免疫性疾病，树突状细胞（Dendritic Cells,DC）在机体免疫反应中扮演着始动者和调节者的角色。研究表明A20基因为调控机体免疫和炎症反应中不可缺少的重要功能基因。动物试验表明特异性敲除肠上皮细胞或DC中A20基因的小鼠出现自发性结肠炎表现，且本课题组前期研究发现IBD患者存在肠道炎症反应过度而A20表达水平上调不足的现象。基于IBD的发病机制及DC、A20在调控机体免疫稳态中的重要作用，本课题拟在前期研究的基础上进一步探讨(1)IBD患者粘膜固有层DC中A20的表达水平；（2）采用基因转染的方法研究增加和降低A20表达对粘膜固有层DC 表面免疫分子、抗原识别受体及信号转导的影响（3）A20对DC刺激T细胞增值能力、TH细胞分化的影响，以进一步明确IBD的发病机制，为IBD的临床诊治提供新思路。

炎症性肠病是一种慢性非特异性胃肠道炎症反应性疾病，其病因和发病机制尚未完全明确。目前普遍认为炎症性肠病为一种自身免疫性疾病，系宿主免疫功能紊乱和肠道菌群共同作用的结果。有研究表明锌指蛋白A20在调控机体免疫和炎症反应中起着关键作用，为NF-KB信号通路中关键的负性调控因子，A20表达水平的异常可能参与了一系列自身免疫性疾病的发生和发展。本课题组前期研究发现炎症性肠病患者肠黏膜中A20表达水平偏低，存在肠道炎症反应过度而A20表达水平上调不足的现象。肠道中的细菌以革兰氏阴性菌为主，而LPS为革兰氏阴性菌细胞壁的主要成份，本课题组在本次研究中，采用LPS刺激HT-29细胞，构建肠上皮炎性细胞模型，然后采用基因转染的方法增加或降低A20表达，研究增加或降低A20表达后对肠上皮细胞炎症反应的影响。研究结果发现在没有LPS刺激时，肠上皮细胞中A20表达水平较低，当LPS刺激后A20表达水平迅速升高，在2小时左右达到高峰。另外，A20表达水平具有时间和剂量依赖性，随着LPS刺激量的增加或刺激时间的延长，A20表达水平有升高的趋势。在静息细胞中，NF-KB与IKB结和，当受到刺激时，IKB被磷酸化及泛素化，使得NF-KB活化进入核内，启动下游的转录。我们的研究发现增加A20的表达可以降低NF-KB的表达水平及NF-KB的核内转移，而降低A20表达时，LPS刺激后NF-KB的表达量增加，且活化增多。临床研究已表明，炎症性肠病患者，肠道中促炎因子的表达水平高于正常对照者，且疾病活动期促炎因子的表达水平高于缓解期。另外，TNF-a为炎症性肠病中关键的促炎细胞因子，TNF-a单抗对炎症性肠病有着较好的治疗作用，但个别患者存在过敏反应及抗抗体的产生，因此，炎症性肠病的治疗中需要不断探索新的治疗药物。本课题组研究发现，增加A20的表达可以降低促炎细胞因子IL-8及TNF-a的表达，研究结果表明A20在调控肠道炎症反应中起重要作用，这表明A20对炎症性肠病的治疗可能具有潜在的应用价值。