荔枝果肉中致炎症物质的分离鉴定及其作用机制研究

荔枝（Litchi chinensis Sonn.）是我国著名的岭南佳果，营养滋补价值高，但食用荔枝易引起炎症性"上火"症状，对消费者健康存在潜在危险。目前荔枝引起炎症反应的物质基础及其机理未见报道，本课题拟采用小鼠巨噬细胞J774体外炎症模型及活性跟踪法，对荔枝果肉中诱导炎症反应的化学成分进行提取分离纯化，应用HPLC-MS，HRMS、IR、NMR等技术对其结构进行鉴定，进而初步探讨活性成分诱导炎症反应的机理，在体外，研究活性成分对巨噬细胞J774自由基水平，细胞内Ca2+，核因子κB（NF-κB）和磷酸化p38MAPK蛋白表达，NF-κB DNA结合活性，环氧化酶-2基因表达以及PGE2分泌的影响，在体内，观察活性成分对机体炎症介质分泌的影响，同时，利用基因芯片研究其对炎症相关信号通路基因表达谱的影响。对于认识与解决荔枝诱导炎症性"上火"有重要的理论与实践意义。

荔枝（Litchi chinensis Sonn.）是我国著名的岭南佳果，营养滋补价值高，但食用荔枝易引起炎症性“上火”症状，本研究利用小鼠巨噬细胞模型，通过活性跟踪法分离鉴定引起炎症反应的活性物质，并初步探讨其作用机制，研究结果如下：（1）采用荔枝果肉不同溶剂粗提物孵育巨噬细胞J774，结果发现乙酸乙酯部粗提物在100－900μg/mL时可以显著提高巨噬细胞炎症因子前列腺E-2（PGE2）和NO的水平（P<0.05），石油醚、正丁醇、水部粗提物对巨噬细胞PGE2、NO含量无显著影响（P>0.05）；（2）采用柱层析分离乙酸乙酯部粗提物，并进行重结晶，通过气质联用与核磁共振对得到的晶体化合物进行鉴定，分别是：苯甲醇、氢化安息香、5-羟甲基糠醛、香叶醇、苯乙醇、香草醇、苯甲酸、2-甲氧基-5甲基苯酚和柠檬醛；（3）分别研究9种单体化合物对巨噬细胞J774炎症因子NO、PGE2水平以及环加氧酶（COX-2）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）基因表达和细胞NF-κB蛋白表达的影响，结果显示，苯甲醇、氢化安息香、5-羟甲基糠醛、香叶醇、苯乙醇、香草醇6种化合物可以不同程度的诱导巨噬细胞NO、PGE2等炎症因子的分泌，其中苯甲醇的活性最强。在1.1-8.5μg/mL范围内，苯甲醇能够刺激巨噬细胞NF-κB/p50表达，诱导IκB降解，并呈现浓度剂量效应。同时，487.5μg/mL氢化安息香和125μg/mL 5-羟甲基糠醛也具有刺激巨噬细胞NF-κB/p50表达，诱导IκB降解的能力。（4）采用Affymetrix 基因芯片，研究乙酸乙酯部粗提物对巨噬细胞炎症相关基因表达谱的影响，结果发现巨噬细胞响应基因的生理功能主要涉及免疫反应、RNA代谢、信号转导、氮化合物代谢等，能够激活NF-κB和MAPK信号通路；（5）采用灌胃ICR小鼠，研究乙酸乙酯部粗提物对机体炎症因子分泌以及氧化还原状态的影响。结果显示，荔枝果肉乙酸乙酯粗提物能够显著提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力（P<0.05），增加小鼠血清和脾脏PGE2、NO水平与MDA含量（P<0.05）。以上结果表明，荔枝果肉中含有的苯甲醇、氢化安息香、5-羟甲基糠醛等化合物能够激活NF-κB和MAPK信号通路，诱导COX-2、iNOS等促炎性细胞因子基因表达，促进炎症因子的分泌，可能进而引发敏感人群的炎症性“上火”反应。