Urocrotin抑制吗啡成瘾大鼠中脑腹侧被盖区神经活动的机制研究

Morphinic reinforcemental and dependent effects mainly via ventral tegmental area dopamine system, and the exaltation of VTA neurons is the critical point for morphine addiction. Some study researched neuroendocrine peptide Urocortin（UCN）related closely to drug addiction. However, the mechanism still unclear. To profoundly identify the mechanism and inhibitory effects of urocortin on VTA nervous activity of morphine addiction rats, the experiment use seven-pipe micro-electrophoretic technique to observe the effects of UCN on VTA neuron's spontaneous discharge changing rule. As well as, the inhibitory effects of UCN on DA neuron's cluster spontaneous discharge, identify UCN and DA on the same VTA neuron. Moreover, use whole cell patch clamp method to approach the effects of UCN on VTA neuron's T-type calcium channel, as well as supply inhibitor of corticotropin-regulating factor 's receptor (CRF-2R) and blocker of protein kinase A (PKA), to observe the mechanism of UCN on VTA neuron's T-type calcium channel. This study will prove, UCN bond to CRF-2R affect PKA pathway, and then inhibit T-type calcium channel, finally inhibit VTA neuron's spontaneous discharge. The results would provide new theory and drug target for drug addiction.

针对吗啡强化和依赖效应主要通过中脑腹侧被盖区（VTA）的DA系统介导，VTA神经元的异常兴奋是吗啡成瘾的关键环节。神经肽UCN与药物成瘾关系密切，但机理不清楚。为明确UCN在吗啡成瘾中抑制VTA神经活动的机制，本实验采用多管微电泳方法，研究UCN降低吗啡成瘾大鼠VTA神经元自发放电变化规律，及UCN对DA能神经元簇发放电模式的影响，明确UCN在VTA神经元中与DA存在汇聚作用。另外，采用全细胞膜片钳技术观察UCN对VTA神经元中T-Ca2+通道影响，给予CRF-2R阻断剂及蛋白激酶A(PKA)通道抑制剂，明确T-Ca2+通道在UCN抑制吗啡成瘾中发挥关键作用。阐明UCN与CRF-R2 结合后，通过PKA信号途径，抑制VTA内DA神经元的T型-Ca2+ 通道，抑制DA神经元异常放电，在吗啡类药物成瘾中发挥抑制作用。实验结果将为揭示药物成瘾机制提供依据，对临床防治提供新思路。

目的 针对吗啡强化和依赖效应主要通过中脑腹侧被盖区（VTA）的DA系统介导，VTA神经元的异常兴奋是吗啡成瘾的关键环节。神经肽UCN与药物成瘾关系密切，但机理不清楚。.方法 本实验采用药物剂量序贯递增给药方法建立吗啡成瘾大鼠模型，七管微电极，研究UCN降低吗啡成瘾大鼠VTA神经元自发放电变化规律，及UCN对DA能神经元簇发放电模式的影响，微电极泳入UCNⅡ，观察UCNⅡ对吗啡成瘾大鼠VTA神经元自发放电的影响是否存在浓度依赖性，同时微电泳CRF-2R阻断剂AST-2B，证明UCNⅡ对VTA神经元放电影响是通过与CRF-2R结合发挥作用。PKA抑制剂，明确UCN2抑制吗啡成瘾中发挥作用的可能机制。另外，观察UCN2对DA能神经元簇发放电模式的影响，明确UCN2在VTA神经元中与DA存在汇聚作用。采用全细胞膜片钳技术观察UCN对VTA神经元中T-Ca2+通道影响，明确T-Ca2+通道在UCN抑制吗啡成瘾中发挥关键作用。.结果 VTA神经元及VTA中的DA神经元均以规则放电为主，偶见不规则放电，未见爆发式放电；而吗啡成瘾模型组中不规则放电和爆发式放电均较常见。微电泳UCN2可使吗啡成瘾大鼠的VTA神经元放电频率减慢，其抑制作用存在浓度依赖性。UCN2 的抑制作用较为明显，几乎没有潜伏期，但是存在后作用。此外，UCNⅡ抑制作用可被AST拮抗,可被PKA抑制剂H89及CRF-2R阻断剂AST-2B取消。UCN2能够明显抑制DA神经元的爆发式放电和不规则放电，且UCN2对DA神经元的簇发放电活动的抑制作用，具有一定潜伏期和后作用。研究已证实VTA中DA能神经元放电模式与UCN降低吗啡成瘾密切相关。另外研究发现，UCN的抑制效应可能是通过与CRF-2R结合后，抑制钙通道开放，降低细胞钙通道电流，减低钙离子含量发挥作用的。.结论 1. UCNⅡ通过与CRF2受体结合抑制VTA神经元自发放电，在VTA病生理情况下起调节作用。.2. 证实UCN2能抑制吗啡成瘾大鼠VTA中DA能神经元簇发放电模式，UCN在VTA神经元中与DA存在汇聚作用。.3. 提示UCN2与CRF-2R 结合后，通过PKA信号途径，，抑制VTA内DA神经元的T型-Ca2+ 通道，抑制DA神经元异常放电，在吗啡类药物成瘾中发挥抑制作用。