不同禽类新城疫病毒感染的细胞差异蛋白分析及功能研究

首先将NA-1株鹅源新城疫病毒与F48E9株鸡源新城疫病毒高度纯化并提取病毒全蛋白，2-DE分析蛋白样品，经第一向等电聚焦、第二向SDS电泳及质谱鉴定，阐明不同禽类新城疫病毒蛋白谱；然后，将NA-1株鹅源新城疫病毒和F48E9株鸡源新城疫病毒分别感染鸡胚成纤维细胞，感染前后总蛋白经2-DE分离及图像分析，MALDI-TOF MS/MS鉴定感染前后差异蛋白，研究并诠释其功能；第三，分析并鉴定NA-1及F48E9株新城疫病毒感染鸡的血清差异蛋白。研究目标为寻找出不同禽类新城疫病毒全蛋白的蛋白谱差异；鉴定出不同禽类新城疫病毒感染前后的差异蛋白，阐述差异蛋白的功能及其在新城疫的感染与发病过程中的潜在作用；筛选与新城疫发生相关的血清蛋白标记，为今后标记疫苗的研究和开发以及建立新的诊断方法奠定基础。

本研究首先将鹅源新城疫病毒NA-1株与鸡源新城疫病毒F48E9株进行纯化，然后将鹅源新城疫病毒NA-1株与鸡源新城疫病毒F48E9株分别感染原代鸡胚成纤维细胞，对病毒感染前后的细胞总蛋白进行2-DE分离及图像分析，通过MALDI-TOF MS/MS质谱鉴定出感染前后的差异蛋白共7个，本研究选取其中3个主要差异蛋白进行其功能研究，分别构建3个蛋白基因的真核表达质粒，转染细胞后，检测其对细胞增殖活性及病毒复制增殖能力的影响，结果表明，过表达这3种蛋白后，对多种细胞的增殖活性具有一定的抑制作用；且对新城疫病毒的复制增殖能力也具有一定的抑制或促进作用。提示这3种蛋白可能在新城疫病毒的感染与发病过程中具有一定的潜在作用。. 将新城疫病毒F48E9株以滴度106EID50/0.1ml，经滴鼻的方式感染2月龄种鸡，分别在发病初期（3d）和急性期（5d）采血，分离外周血淋巴细胞，细胞全蛋白样品经2-DE分离及图像分析，通过MALDI-TOF MS/MS质谱鉴定出感染前后的差异蛋白共7个，本研究选取其中3个主要差异蛋白进行其初步研究。