miR-205 在VEGF促卵巢癌细胞侵袭中的"开关"作用

卵巢癌是妇科最恶性的肿瘤，发病率和死亡率高、易转移，目前仍缺乏有效筛查与早期诊断手段。项目分析前期筛选的miR-205及其候选靶蛋白Ezrin、Lamin A/C的表达及VEGFR 磷酸化与卵巢癌细胞侵袭性、卵巢癌临床分级、病理分型及转移的相关性。比较VEGF 诱导后细胞侵袭性的变化及与miR-205 表达水平的关系。miR-205沉默及过表达细胞系的功能研究、动物实验及突变靶基因3′UTR荧光素酶报告基因研究miR-205对靶蛋白的调控。miR-205、VEGFR沉默及过表达载体双重转染卵巢癌细胞系，检测miR-205表达、VEGFR 磷酸化及功能，进一步证实miR-205的"开关"导向、与VEGF调控卵巢癌细胞侵袭性的协同作用。首次从miR-205对靶蛋白调控功能的开启及与VEGF协同作用的全新角度探讨卵巢癌细胞侵袭性的调控机制，为发现卵巢癌早期筛查与诊断的标志分子提供线索。

卵巢癌易侵袭生长及发生早期转移，但其具体机制尚未明了。项目以两组配对侵袭性不同的卵巢癌细胞系及临床标本为研究对象，分析前期筛选的miR-205及其候选靶蛋白Ezrin、lamin A/C的表达及VEGFR 磷酸化、VEGF血清水平与卵巢癌细胞侵袭性、卵巢癌临床分级、病理分型及转移的相关性。miRNA 阵列分析、免疫染色、qPCR及WB等进一步证实了VEGF能显著上调miR-205及下调Ezrin 、 lamin A/C的表达。侵袭实验、Annexin V-FITC等显示VEGF能促进卵巢癌细胞侵袭与抑制凋亡。对比研究了VEGF诱导前后miR-205及其靶蛋白对细胞生物学行为的差异影响。双荧光素酶报告基因显示miR-205能直接靶向 Ezrin 、 lamin A/C。体内外实验进一步证实了沉默与过表达miR-205 能调控卵巢癌细胞侵袭、增殖及lamin A/C的表达。故项目研究结果提示VEGF 促卵巢癌细胞侵袭性的部分新机制是通过miR 205调控Ezrin 、lamin A/C差异表达实现的。且更有意义的是lamin A、C异构体在“VEGF- miR205-lamin”轴中存在差异表达，此为进一步研究卵巢癌侵袭转移的分子机制提供了新的思路。