HBV多聚酶抑制干扰素-α激活的JAK-STAT信号通路机制研究

乙型肝炎病毒（HBV）拮抗干扰素效应通路是干扰素-α治疗不佳及疾病慢性化发展的重要机制之一。我们前期工作证实HBV聚合酶可普遍性抑制干扰素-α效应通路，且与通路中关键转录因子STAT1的入核障碍相关。ISGF3是IFN-α效应通路中关键且特异性的转录复合体，由活化的STAT1、STAT2与IRF9组成。本研究拟在前期基础上从ISGF3形成、核浆转位及其转录活性变化等角度, 继续深入研究HBV聚合酶抑制IFN-α效应通路（JAK/STATs）的分子机制。本课题将借助native PAGE、PAGE/免疫印迹、免疫共沉等方法集中探讨HBV聚合酶对ISGF3形成以及核转位的影响，主要包括对ISGF3组分蛋白表达与修饰，及对核浆转运蛋白功能的影响等。通过上述研究，有助于寻找出HBV与干扰素系统作用的关键靶点，为揭示IFN-α治疗失效的机制，开发新型抗HBV药物和提高干扰素疗效提供理论和实验基础。

乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus, HBV）感染引发的慢性乙型肝炎是严重影响我国人民健康的重要疾病，α-干扰素（Interferon-α，IFN-α）是最早、也是目前最常用的治疗乙型肝炎的药物之一，但是单独用药时，仅有30%左右的患者出现较好的应答性。乙型肝炎病毒拮抗α干扰素效应通路是α干扰素治疗不佳及疾病慢性化发展的重要机制之一，但目前对于HBV拮抗的具体机制仍不清楚。本项目前期的研究工作发现HBV聚合酶蛋白（polymerase, pol）可以干扰IFN效应通路中一个关键性转录因子 STAT1的核转位。本项目在此发现基础上，继续深入研究了HBV聚合酶抑制IFN-α JAK/STATs 效应通路的分子机制及其生理意义。通过在人类肝细胞系中过表达或干扰HBV聚合酶的表达，我们明确了HBV聚合酶对IFN刺激基因（ISGs）表达以及IFN-α抗病毒活性的抑制作用。进一步的机制研究发现，HBV聚合酶可能通过两个机制来抑制IFN-α效应通路：一方面通过竞争性地干扰信号转导与转录激活因子STAT1/2与核孔运输蛋白Impα5的结合，从而抑制转录复合体ISGF3的核转位；另一方面，通过抑制PKCδ激酶催化的STAT1 727位丝氨酸磷酸化，从而降低ISGF3复合体的转录活性。对HBV聚合酶的截短分析表明，HBV聚合酶TP和RH结构域分别与Impα5和PKCδ存在着相互作用，是其发挥抑制效应的负责区段。更进一步，为了验证体外发现的机制在体内是否存在，我们建立了基于尾静脉高压注射的小鼠急性HBV感染动物模型，和来源于慢性乙型肝炎患者的肝活检标本模型。HBV聚合酶抑制IFN-α信号通路的相关机制在这两种体内模型中均得到了验证。以上研究结果明确了HBV聚合酶在乙型肝炎病毒拮抗IFN-α效应通路中的重要作用，其中揭示的分子机制可能为优化临床治疗方案提供理论依据。目前本项目已按预定计划完成，培养博士研究生1人，发表SCI论文1篇，国际学术会议论文1篇。