EDTMP修饰柔性纳米脂质体载野黄芩苷缓释系统的构建及其靶向促成骨作用的研究

In recent years, the technique of dental implant has become the main repair method for the patients with dentition defect or edentulous. Therefore, how to solve the problem of bone defect, promote bone tissue regeneration, and restore the morphology and function of the jaw bone has become hot topics. Looking for a simple, inexpensive and safe way to promote bone regeneration is a direction in the field of dental implant. The studies have shown that scutellarin has good osteogenesis, including promotion of differentiation of bone cells and inhibition.of osteoclast. Therefore, in ordor to find a better drug delivery system for improving the bioavailability of scutellarin, and provide a better solution and theoretical basis for clinical bone regeneration, we will fabracate bone-targeted ultradeformable nano-lipid carrier containing scutellarin and study its osteogenetic effect and mechenism in vitro and in vivo..There are several parts of this study. Part one: synthesis, detection and optimization of the bone-targeted ultradeformable nano-lipid carrier containing scutellarin. Part two: the in vitro osteogenic effect of bone-targeted ultradeformable nano-lipid carrier containing scutellarin for bone regeneration. Part three: the in vivo osteogenic effect of bone-targeted ultradeformable nano-lipid carrier containing scutellarin for bone regeneration.

多因素导致的颌面部骨量不足、骨质不佳限制了牙齿缺失患者种植义齿修复的实施，目前修复骨缺损的各种方法多存在技术复杂、费用高昂、治疗周期漫长、生物安全性不足等问题。且骨组织的硬度大、渗透性差、血流量低，使得药物很难通过传统给药方式到达病灶部位。前期研究表明，野黄芩苷具有调节骨代谢的作用，能够诱导成骨细胞分化，抑制破骨细胞分化，可作为一种简单、廉价、安全且能诱导内源性骨组织生长的药物应用于临床。本研究旨在构建EDTMP修饰的载野黄芩苷柔性纳米脂质体，其中：（1）通过脂质体微球的包裹，使野黄芩苷缓慢释放于骨缺损处，持续发挥药效；（2）EDTMP对羟基磷灰石具有特异性亲和力，将其修饰于脂质体表面，使之靶向锚定于骨组织，提髙野黄芩苷局部生物学利用度。本课题通过细胞和动物实验，验证新型药物制剂对成骨细胞增殖分化的影响，初步探讨其可能分子机制，为临床上缺牙区骨量不足、骨质欠佳的问题提供新的解决方案。

多因素导致的骨量骨质不佳限制了种植义齿修复的实施，目前修复骨缺损的各种方法多存在技术复杂、费用高昂、治疗周期漫长、生物安全性不足等问题。且骨组织硬度大、渗透性差、血流量低，药物很难通过传统给药方式到达病灶部位。前期研究表明，野黄芩苷具有调节骨代谢的作用，能够诱导成骨细胞分化，抑制破骨细胞分化，可作为一种简单、廉价、安全且能诱导内源性骨组织生长的药物应用于临床。.本研究构建了EDTMP修饰的载野黄芩苷柔性纳米脂质体（S-UNL-E)：通过脂质体微球的包裹，使野黄芩苷缓慢释放于骨缺损处，持续发挥药效；EDTMP对羟基磷灰石具有特异性亲和力，将其修饰于柔性纳米脂质体表面，使之靶向锚定于骨组织，提髙野黄芩苷局部生物学利用度。.（一）采用逆相蒸发法，设计制备出具有主动骨靶向的柔性纳米脂质体载野黄岑苷。电镜观察S-UNL-E的形态，激光散射法测量其粒径，测定药物的包封率，并采用正交法优选出最佳制备方案。结果表明，S-UNL-E的最佳工艺条件为磷脂胆固醇、磷脂短黄肽、磷脂胆酸钠和磷脂硬脂酰胺的质量比分别为2：1、15：1、7：1和7：1，EDTMP的质量为30mg。S-UNL-E的平均粒径为156.67±1.76nm，Zeta电位为−28.77±0.66mv。.（二）培养纯化大鼠成骨细胞，接种于不同组别的培养基中，分析细胞在不同处理条件下的分化情况。结果表明，S-UNL-E组细胞分布密集，细胞结构完整，肌动蛋白丝清晰明显。S-UNL-E可显著增加成骨细胞ALP的表达，提高骨钙素蛋白的含量，促进钙结节的形成，促进成骨细胞的分化和成熟，而S-UNL-E（2.5×108）组促进细胞分化的效果最好。.（三）通过网络药理学和转录组测序分析结果，筛选出野黄芩苷药物作用靶点靶点基因是PTGS2，信号通路是WNT/β-catenin。构建大鼠骨质疏松模型，通过动物实验，研究验证了S-UNL-E可促进骨质疏松动物股骨骨缺损的愈合，并验证了以上筛选结果。.综上所述，本研究成功构建了一种具有高包封率、高稳定性的S-UNL-E材料，可有效促进成骨分化和骨形成，为临床上缺牙区骨量不足、骨质欠佳的问题提供新的解决方案。