核受体辅助因子在骨质疏松骨形成中的机理探讨及补肾健脾化瘀方的干预研究

Osteoporosis is caused by adding with age and the functions of gonad falling，geopardize the health for elderly seriously. Nuclear hormone receptor is independent with ligand, regulates the expression of much target genes with the ligands and coregulators. Nuclear receptors were deemed to play an important role in osteoporosis,but there is no explicit report about nuclear receptor coregulators' functions in the course of bone formation. Researches have shown that nuclear receptor coregulators could activate estrogen receptors androgen receptors effectively, such as ACTR ,but there is no explicit report about its functions in the course of bone formation.Our early study found that PGC-1a could regulate the expression of oesteocalcin，it is a symbol of bone formation. This research would test the associativity between nuclear receptor coregulators and osteoporosis by making use of abundant clinic samples; utilizing adenovirus genetic engineering of overexpression and silence，study the actions of NHRCs on osteoblast proliferation and differentiation；work out the functions of NHRCs in the course of Rats'bone formation；explore the influence about bushen jianpi huayu prescription on NHRCs .

骨质疏松是由于年龄增加,性腺功能减退所导致的疾病，严重危害老年人的健康。核受体具有配体依赖性，与其配体及辅助调节因子相互作用调控众多靶基因的表达。虽然核受体被认为在骨质疏松中起着重要作用，但核受体辅助因子(NHRCs)在核受体调控骨形成中的作用尚无明确报道。研究表明NHRCs ACTR能有效地激活雌激素受体和雄激素受体的活性，但有关其在骨形成中的作用尚无明确报道。我们前期研究发现PGC-1a可以调节骨形成标志蛋白oesteocalcin的基因表达。本课题①拟采用丰富的临床样本检测NHRCs与骨质疏松的关联性；②利用腺病毒超表达和沉默技术研究NHRCs在成骨细胞增殖分化中的作用；③研究NHRCs在大鼠骨形成中的作用，探索补肾健脾化瘀方对NHRCs的影响。

背景 绝经后骨质疏松症（PMO）是最常见的与年龄相关的骨量丢失性疾病，与雌激素缺乏有关。近年来的研究结果显示，雌激素相关核受体（ER、ERRα、PPARγ）及其辅助激活因子（SRC-1、SRC-2）在骨骼发育中起着重要作用。而核受体辅助激活因子SRC-3、PGC-1α可能参与成骨细胞的增殖和分化过程，但作用机制尚不清楚。方法 1、采集PMO患者骨标本和外周血，通过RT-PCR、Western blotting和酶联免疫吸附法等方法，研究SRC-3和PGC-1α与患者骨密度及骨转换水平的相关性。 2、采用腺病毒介导的shRNA沉默和高表达技术研究SRC-3和PGC-1α在骨肉瘤MG63细胞增殖、成骨分化中的作用，进一步通过ALP活性、qPCR、Western-blotting检测SRC-3和PGC-1α对MG63中调节细胞成骨分化的MAPK信号通路相关蛋白表达的影响。3、以去卵巢骨质疏松大鼠为模型，以补肾中药复方为工具药，通过测量骨密度、骨力学性能、骨组织形态计量学、外周血SRC-3、PGC-1α等蛋白含量、股骨骨髓组织脂肪数以及股骨髓中相关因子mRNA的表达，研究补肾中药复方促去势大鼠骨质疏松骨形成过程中对SRC-3和PGC-1α表达的影响。结论 1、在mRNA分子和蛋白双水平证实核受体辅助激活因子SRC-3和PGC-1α在PMO患者骨组织和血清中表达水平明显降低，表明二者可能在骨转换水平调控中发挥一定作用。2、通过MTT、ALP活性、qPCR、Western Blot结果显示，腺病毒介导SRC-3和PGC-1α双基因联合转染MG63后，促进MG63增殖的同时，P38MAPK通路被激活，激活内源性ERRα的基因表达，提高ALP活性以及成骨特异基因Runx2、Osteocalcin、Osterix的表达，进而促进MG63成骨分化。而SRC-3和PGC-1α双基因联合转染的这些功能可以被腺病毒介导的shSRC-3和shPGC-1a双基因联合沉默所抑制。3、补肾中药复方可能是通过提高骨髓组织中SRC-3和PGC-1α mRNA表达水平，降低ERRα及其下游基因OPN mRNA表达水平，促进成骨特异基因OPG、Runx2的表达，抑制成脂肪特异基因PPARγ2的表达，从而提高去势大鼠骨密度和骨强度，降低骨转换水平和骨髓脂肪量。