地耳草间苯三酚萜类衍生物化学成分及抗宫颈癌作用机制研究

Hypericum japonicum are widely applied in traditional Chinese medicine to protect the liver, enhance immunity and anti tumor. The applicant found that petroleum ether fraction of Hypericum japonicum could significantly anti cervical carcinoma in our preliminary study. Six unprecedented novel skeletons of phloroglucinol-sesquiterpene hyperijaponals A-F (compound 1a/1b, 2a/2b, 3a/3b) were isolated from petroleum ether fraction, and they were three pairs of enantiomers. Pharmacological experiments had proved that the novel skeletons of phloroglucinol-sesquiterpene derivatives 1b, 2b and new phloroglucinol-monoterpene derivative 8b could inhibit the growth of Caski cells. Moreover, compound 1b could increase the expression of imR-506, which may suggested that phloroglucinol-terpene derivatives could anti cervical carcinoma by regulating the expression of imR-506. In this project, more compounds with anti-cervical carcinoma activity will be separated from petroleum ether fraction of Hypericum japonicum. The most optimum compounds will be chose through Caski cell growth inhibition, apoptosis and tumor inhibition in vivo. The mechanism of these compounds will be explored after structure identification. The implementation of this project will enhance the awareness of cervical carcinoma, and point out the function of imR-506 in anti-cervical carcinoma. Therefore, it is of important significance for the control of cervical carcinoma and the development of new anti-cervical carcinoma medicine with high efficiency and low toxicity.

地耳草为藤黄科植物，具有保护肝脏、提高免疫力、抗肿瘤的作用。申请者发现地耳草石油醚部位有显著抑制宫颈癌的活性，并从中分离出了一系列间苯三酚萜类化合物，其中有三对互为对映异构体的新骨架间苯三酚倍半萜衍生物。 活性实验表明新骨架间化合物1b、2b和新间苯三酚单萜化合物8b有显著抑制Caski生长的活性，且RT-PCR检测化合物1b能上调宫颈癌RT-PCR检测细胞中imR-506的表达。基于前期研究，项目组将对地耳草石油醚部位化合物进行深入的分离和鉴定，通过化合物对Caski细胞的生长抑制、促进凋亡以及动物体内抑瘤实验，筛选出活性最优化合物。探讨最佳活性化合物通过上调imR-506表达而具有抗宫颈癌的作用机制。项目的实施有助于我们更清晰认识到imR-506在宫颈癌中的作用，对进一步研究宫颈癌疾病的防治和开发治疗宫颈癌药物有重要意义。

地耳草为藤黄科植物，全草有清热解毒、止血消肿的功效，临床上可用于保护肝脏、提高免疫力、抗肿瘤等。课题组采用现代分离方法对地耳草进行了分离纯化，从石油醚萃取部位分离出22个化合物，包含10个新化合物，12个已知化合物。从氯仿部位分离到18个化合物，其中3个化合物，15个已知化合物。综合运用多种现代波谱技术及化学检测方法，鉴定了分离到的化合物的结构。在得到的13个新化合物中：（1）2个新颖骨架的倍半萜类衍生物；2个新的间苯三酚倍半萜衍生物；（2）4个新的间苯三酚单萜类衍生物；（3）2个新的杂萜类化合物；（4）1个新的降倍半萜类；（5）2个新吡喃酮类化合物。分离得到的新化合物中有部分为对映异构体，新化合物的发现丰富了藤黄科植物次生代谢产物的类型。分离得到的化合物分别进行了细胞毒活性和抗病毒活性试验。细胞毒活性结果显示部分间苯三酚萜类衍生物对SW480细胞、Caski细胞有一定抑制作用，且化合物2对宫颈癌Caski抑制作用IC50值为25.9μM。抗EBV实验结果显示大部分间苯三酚倍半萜衍生物表现出非常好的抗EB病毒活性，部分间苯三酚萜类衍生物抗EB病毒活性EC50＜10μM。采用反相虚拟筛选技术，找出化合物分子与蛋白质分子结合的最佳构象，计算二者相互作用的结合能，初步探讨化合物抗EBV作用机制。地耳草化学成分的研究丰富了藤黄科植物中间苯三酚衍生物的种类，活性试验证实地耳草间苯三酚倍半萜衍生物为具有抗EB病毒的潜力的化合物。