14-3-3σ沉默在肺癌细胞侵袭转移中的作用及分子机制研究

RNA干扰（RNA interference, RNAi）是由双链RNA介导的序列特异性的mRNA降解所致的转录后基因沉默过程，可方便快捷地研究基因的功能。前期的研究中，对肺鳞癌原发灶与淋巴结转移灶中的肿瘤细胞进行了比较蛋白质组学研究，找到可能与肺癌细胞转移的生物学功能相关的候选分子，并在细胞水平证实14-3-3σ表达下调可以促进肺癌细胞的侵袭转移能力。本课题拟采用RNAi技术特异地沉默靶基因14-3-3σ的表达，在细胞水平研究14-3-3σ沉默后引起的肺癌细胞分泌蛋白的表达变化，细胞及动物水平研究14-3-3σ沉默后肺癌细胞生长、增殖、细胞周期和侵袭能力的变化，并应用基因芯片、蛋白质组学技术对14-3-3σ稳定沉默肺癌细胞与对照组进行基因芯片及蛋白质组的比较研究，生物信息学方法寻找14-3-3σ基因沉默可能介导的重要信号通路，以揭示14-3-3σ沉默在肺癌细胞侵袭转移中的可能作用机制。

课题按照研究计划进行，但根据相关研究对方案做了调整。首先，我们明确了14-3-3 sigma沉默促进肺癌细胞体外迁移。在开展14-3-3 sigma课题的同时，本课题组围绕miR-19亦在肺癌上开展了相关研究，研究中意外发现miR-19在肺癌细胞上过表达可诱发上皮-间充质转化(Epithelial-mesenchymal transitions, EMT)，而在生理、病理(如肿瘤)过程中，miR-19促进EMT的功能迄今尚未见报道；此外，我们在围绕miR-19的研究过程中亦证实p53是miR-19的一个靶基因，miR-19在肺癌细胞上过表达将下调p53表达，而已有研究证实作为抑瘤基因的14-3-3 sigma是p53的靶基因，同时p53负向调控肿瘤的EMT和侵袭转移。基于此种情况，我们调整了本课题的研究重点，即首先主要确证p53和14-3-3 sigma的上游调控分子miR-19在肺癌细胞EMT和侵袭转移过程中的作用，在此基础上，在后续研究中进一步阐明miR-19通过调控p53—14-3-3 sigma axis在肺癌细胞EMT和侵袭转移中的作用及分子机制。.我们围绕miR-19的研究显示，miR-19表达上调可诱导人肺癌细胞发生EMT, 并促进其迁移和侵袭，同时发生EMT的细胞增殖减慢和抗凋亡能力增强；本课题曾先后采用裸鼠尾静脉移植实验和肺原位移植瘤实验，以明确miR-19在肺癌转移中的作用，但均未成功。接下来，我们将进一步改进和优化实验方案，再次开展体内转移实验，已明确miR-19在肺癌转移中的作用。.总之，本课题利用体外细胞模型，阐明了miR-19在肺癌细胞EMT和侵袭过程中的作用，明确了miR-19在肺癌细胞上过表达将下调其靶基因p53表达，同时初步明确14-3-3 sigma沉默可促进肺癌细胞迁移，这些数据将为在后续研究中进一步阐明miR-19通过调控p53—14-3-3 sigma axis在肺癌细胞EMT和侵袭转移过程中发挥重要作用提供宝贵线索，相关研究将为寻找新诊疗靶点提供实验基础。.在本课题执行过程，培养博士研究生（已毕业）和硕士研究生各1名。目前有两篇文章已投国外SCI杂志稿，此外课题组与本项目相关的其他研究数据正在整理待投稿发表。