内皮祖细胞介导溶瘤麻疹病毒疫苗株治疗人肺癌：体外最佳装载策略、体内“药代动力学”研究

以肿瘤特异靶向的细胞为载体介导能自我复制、选择性杀伤肿瘤的溶瘤病毒，是治疗人类恶性肿瘤实用有效的策略和研究热点。但是对不同细胞载体，如何达到体外最有效的病毒装载、如何保证装载病毒的细胞在体内能不被免疫识别地靶向运输等，缺乏专门的研究，而这两方面恰恰是决定治疗的关键。过去我们证实了成人外周血分离的内皮祖细胞，能介导溶瘤麻疹病毒疫苗株避开抗病毒中和血清、体内靶向治疗人恶性神经胶质瘤，有临床转化前景。本项目利用基因重组的麻疹病毒在感染细胞内表达相应的生物标记物，如绿色荧光蛋白、癌胚抗原、碘钠泵等，研究内皮祖细胞介导溶瘤麻疹病毒体外最佳装载策略、研究其在人弥散性肺癌小鼠体内的"药代动力学"，提供肿瘤靶向性细胞载体介导溶瘤病毒治疗癌症必须的参数，使其标准化和优化，推动该策略的临床转化。

溶瘤麻疹病毒疫苗株治疗肿瘤是有效的策略，目前进入几项临床试验治疗晚期肿瘤。机体免疫对溶瘤病毒的识别和抑制，是该策略的主要瓶颈。具有肿瘤归巢作用的细胞被证实能够作为溶瘤病毒的载体，保护病毒在机体内不被免疫识别地输送到肿瘤局部，从而发挥溶瘤作用。然而，在体外如何有效装载，决定该策略的溶瘤效果。.本课题在前期工作基础上，在人外周血分离培养的内皮祖细胞和T淋巴细胞上，详细研究了体外装载时间和装载剂量对溶瘤效果的影响，并阐明其相关机制。我们发现，长时程的体外装载，能够有效提高载体细胞的病毒复制，然而，在含有抗病毒血清的条件下，并不能提高溶瘤的效果。进一步我们发现，载体细胞表面病毒特异性抗原H蛋白的表达，与装载的时程密切相关，长时程装载显著提高H蛋白在包膜的表达，从而导致抗病毒血清对载体细胞的识别。而短时程装载（少于12小时），即使在较高的初始病毒感染剂量下，H蛋白在包膜的表达量维持在低水平。最后，我们确定了在体外能够达到最佳溶瘤效果的装载时间和初始装载病毒的量。本研究为今后临床使用细胞载体装载溶瘤病毒的治疗策略提供有有效的实验参数和依据。.同时，在研究过程中，我们发现麻疹病毒能够诱导完整的细胞自噬，并利用细胞自噬抑制感染细胞的抗病毒固有免疫，从而促进病毒的复制。进一步研究发现，麻疹通过线粒体自噬，抑制锚定在线粒体外膜上的固有免疫信号转导分子MAVS，从而达到抑制抗病毒免疫并促进病毒复制的目的。最后，我们证实麻疹诱导的线粒体自噬是由SQSTM1/p62分子介导的。这些发现，提示能够通过调控细胞自噬水平来促进病毒的瘤内复制，促进其溶瘤作用。.综上，如何解决溶瘤病毒治疗存在的瓶颈，我们的研究提供了重要的理论依据和实用的方法，具有较好的临床转化价值。