柑橘黄龙病病原菌亚洲种多基因位点多样性研究

柑橘产业是我区农村经济的支柱产业，具有很强的发展优势，但黄龙病是柑橘生产上的一种毁灭性病害，给我区的柑橘生产带来严重损失。我国黄龙病的病原属于亚洲种类型，其多样性分析局限于16S/23S基因位点的研究。本项目在申请人发现亚洲种内在rplKAJL-rpoBC位点上rpoB基因和rpoC基因区间有较大的插入缺失，在16S/23S rRNA位点上5'端及omp基因位点有单核苷酸变化的基础上，通过在不同位点采用不同方法设计不同引物对不同地理来源、不同品种、不同症状类型的柑橘黄龙病样品进行扩增，在rpoB基因和rpoC基因区间、简单序列重复位点和单核苷酸位点上构建聚类图，探讨亚洲种种内间的多样性。本项研究预期成果可为阐明亚洲种种内间的分类地位提供重要依据，并为进一步研究柑橘黄龙病亚洲种种内间的专性检测及鉴定奠定基础。

柑橘产业是农村经济的支柱产业，但黄龙病是柑橘生产上的一种毁灭性病害，给柑橘生产带来严重损失。我国黄龙病的病原属于亚洲种类型，其多样性分析局限于16S/23S基因位点的研究。本项目收集了国内不同县市、不同柑橘品种和不同症状类型的黄龙病疑似样品，通过提取DNA进行黄龙病检测，筛选出阳性样品用于不同基因位点的分析。实验结果如下：（1）收集到来源于广东、广西、福建、湖南、云南、贵州、江西、浙江和海南9个省50多个县市包括柑类、桔类、杂柑类、橙类、柚类和金柑类黄龙病疑似样品2000多个。（2）筛选出了一种DNA快速提取方法，利用该方法完成了所有疑似样品DNA的提取。（3）建立了黄龙病检测体系，完成了所有疑似样品DNA的检测。（4）筛选了部分阳性样品对rpoB基因和rpoC基因区间的多样性进行分析，未发现有多样性。（5）筛选了部分阳性样品对简单序列重复位点的多样性进行分析。结果表明，不同地理来源及不同寄主类型的黄龙病亚洲种病原有明显的多样性，不同引物对柑类、橙类、柚类和金柑类的黄龙病亚洲种扩增结果有明显不同，在柑类中有多态性的引物，在橙类中没有多态性；同一引物对不同地理来源的同一品种类型扩增结果也有明显区别。（6）筛选了部分阳性样品对16S/23S基因位点的多样性进行分析。结果表明，亚洲种内之间同源性非常高，但表现出一定的差异性。本项目研究结果为阐明亚洲种种内间的分类地位提供了重要依据，并为进一步研究柑橘黄龙病亚洲种种内间的专性检测及鉴定奠定了基础。