SRSF10介导pre-mRNA可变剪接调控HPV16/18型宫颈癌细胞生长的分子机制

The high-risk HPV E6 and E7 protein in cervical cancer is the main pathogenic factors, but the carcinogenic mechanism still has many unsolved mysteries. Recent studies indicate that abnormal alternative splicing plays an important role in the occurrence and development of tumors, then the high-risk HPV E6/E7 promote the occurrence and development of cervical cancer by abnormal alternative splicing? In our previous experiment, knockdown of E6/E7 in HPV16/18 cervical cancer cells, and found that the expression of most splicing factors changed significantly, particularly SRSF10, a SR family protein; further study showed that SRSF10 can promote cervical cancer cell proliferation, and inhibit its apoptosis. Therefore we put forward that HPV E6/E7 could regulate the expression of SRSF10, then lead to abnormal alternative splicing of tumor cell growth related genes, thereby promote tumor development. Based on previous studies, further experiments, such as Chip, RNAseq, CLIP etc., will reveal the molecular mechanism of SRSF10 overexpression and alternative splicing of cell growth genes-related regulated by SRSF10, and constructing artificial splicing factors to evaluate the feasibility for SRSF10 as a target for the treatment of cervical cancer.

高危型HPV E6和E7蛋白是宫颈癌主要致病因素，但其致癌机制仍有许多未解之谜。近来研究表明pre-mRNA选择性剪接异常是导致肿瘤发生发展的重要原因，那么高危型HPV E6/E7是否通过影响异常选择性剪接促进宫颈癌的发生发展呢？我们前期实验在HPV16/18型宫颈癌细胞中敲减E6/E7，发现大部分剪接因子存在差异表达，其中以SR家族蛋白SRSF10变化尤为显著;且SRSF10可促进宫颈癌细胞增殖、抑制其凋亡。因此我们推测，HPV E6/E7可能通过调控SRSF10的表达引起宫颈癌细胞生长相关基因的异常选择性剪接，从而促进宫颈癌的发生发展。本项目拟在前期基础上，利用ChIP、RNAseq、CLIP等实验深入揭示E6/E7如何调控SRSF10高表达以及SRSF10选择剪接下游靶基因的具体机制；构建人工剪接因子探索以SRSF10作为靶点治疗宫颈癌的可行性，为宫颈癌的机制研究及治疗提供新的思路。

目的：HR-HPV病毒E6E7 蛋白是诱发宫颈癌的主要始动因素，但仅 HPV感染并不足以致癌，需要其他促癌因素的共同作用。在肿瘤中多存在剪接因子的异常表达，肿瘤的十大典.型生物学行为均涉及基因的异常可变剪接。考虑到 HR-HPV 感染及异常可变剪接在肿瘤发生中的重要作用，本课题拟探究 HR-HPV 感染、可变剪接与宫颈癌间的关系，深化对 HR-HPV 致宫颈癌机制的认识并探究靶向可变剪接以治疗宫颈癌的可能。 .内容及方法：1）在 HPV16/18 阳性的宫颈癌细胞系中干扰 E6E7 表达，探究E6E7是否调控剪接因子的表达并筛选出变化最显著者 SRSF10。2）数据库分析SRSF10在宫颈癌中的表达，并进行IHC验证；构建sh SRSF10 宫颈癌稳转株，检测SRSF10 在宫颈癌中的功能。3）检测 E2F1 对 SRSF10 表达的调控，明确 E6E7调SRSF10 的具体机制。4）分析 SRSF10 调控的可变剪接靶基因并验证调控。5）SRSF10 介导 IL1RAP可变剪接对 IL1β-NF-κB 通路及下游免疫检查点分子 CD47 的调控。 .结果：1）干扰 E6E7 后剪接因子 SRSF10 下调显著。2）干扰SRSF10可抑制宫颈癌细胞的成瘤能力。3）转录因子E2F1促进 SRSF10 的转录激活上调SRSF10 的表达。4）SRSF10调控IL1RAP的可变剪接促进m IL1RAP的产生。5）SRSF10 介导的IL1RAP可变剪接通过调控 IL1β-NF-κB通路上调免疫检查点分子CD47的表达。.结论： HR-HPV E6E7 通过 E2F1 促进剪接因子 SRSF10 的转录激活，上调其表达。 SRSF10介导 IL1RAP 可变剪接通过调控 IL1β-NF-κB 通路上调免疫检查点分子 CD47 的表达，抑制巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬，促进宫颈癌的形成。