鸡传染性贫血病毒与易感细胞互作蛋白的分子鉴定

The infection of chicken infectious anemia virus (CIAV) mainly causes the disease of immunosuppression in chicks, which characterized by aplastic anemia and systemic atrophy of lymphatic tissues. Recently, the frequent co-infection of CIAV with other pathogens has affected the healthy and sustained development of the domestic chicken industry in China. Although hemocytoblast and T cells are considered to be the major target cells for CIAV infection, the molecular basis of CIAV infection is still unclear. In this study, the protein molecules on susceptible cells for CAV infection, and their epitopes and polymorphisms will be identified using CIAV susceptible cell lines (T cell MSB1 and macrophage HD11), and CIAV structural protein VP1 and non-structural protein VP2 through superinfected resistant cell lines, immunoprecipitation, mass spectrometry, receptor reconstruction, knockdown or deletion, site directed mutagenesis, etc. The results will have important theoretical guiding significance for elucidating the molecular basis of CIAV infection and pathogenesis, and practical application value for breeding the resistant chickens against CIAV.

鸡传染性贫血病毒（CIAV）感染主要引起雏鸡的以再生障碍性贫血以及全身性淋巴组织萎缩为特征的一种免疫抑制性疾病。近几年，CIAV与其它病原共感染的普遍性制约了国内养鸡业的健康持续发展。虽然造血细胞及T细胞被认为是CIAV感染的主要靶细胞，然目前尚不清楚介导CIAV感染的分子基础。本项目拟利用CIAV易感T细胞MSB1、巨噬细胞HD11以及CIAV结构蛋白VP1与非结构蛋白VP2，通过构建超感染抗性细胞系，利用免疫共沉淀，质谱分析，受体重建、敲低或缺失，定点突变等技术鉴定出CIAV感染易感细胞的蛋白分子，解析细胞受体表位及其多态性。研究结果将对于明确CAV感染致病分子基础及培育抗CIAV品系鸡具有重要理论指导意义及实际应用价值。

鸡传染性贫血是由鸡传染性贫血病毒（CIAV）感染引起的一种危害严重的禽类免疫抑制性疾病，给全球家禽养殖业造成了巨大的经济损失。然而目前对介导CIAV感染的分子机理知之甚少，在CIAV基因组编码的三个蛋白VP1、VP2及VP3中，衣壳结构蛋白VP1被认为在介导CIAV感染宿主细胞及诱导产生中和抗体中具有极其重要作用，VP1是如何与易感细胞表面受体结合启动病毒感染及其分子基础尚需进一步探究。本研究首先对疑似CIAV感染病例以及疑似污染有CIAV的疫苗进行病毒分离和序列分析，为进一步研究国内CIAV的分子流行及其致病性提供了材料。以基于VP1蛋白的合成表位多肽建立了一种快速简便的监测CIAV抗体的血清学检测方法，并与IDEXX试剂盒进行了比较检测，根据阳性检出率和阴阳性符合率等结果表明，该ELISA方法在临床检测个体中是否存在CIAV抗体时，具有阳性检出率高的特点，为临床免疫监测CIAV抗体提供了良好的应用前景。以分离病毒CIAV-JS-CZ的基因组为模板，成功构建VP1真核表达重组质粒pcDNA3.1-Hygromycin-VP1，并转染LMH细胞，通过药物潮霉素B筛选获得表达CIAV的VP1蛋白的LMH细胞系。以基于VP1蛋白的合成表位多肽为免疫原，通过ELISA和IFA双重筛选，结果获得5株分泌抗CIAV的VP1单克隆抗体。利用获得的抗VP1单克隆抗体，通过免疫共沉淀、SDS-PAGE、银染、质谱测序以及Real-time PCR等技术进行了与VP1蛋白互作细胞蛋白的筛选、鉴定及其功能研究。研究结果发现，VP1蛋白可与宿主蛋白ATP2A2、SLC25A13、HSPA8以及FAM49B进行有效互作。Real-time PCR检测数据结果表明，FAM49B蛋白可促进CIAV在LMH细胞中的增殖，而其余3个互作蛋白对CIAV复制无显著影响。研究结果为进一步探究CIAV分子流行特征提供了技术支撑，为解析CIAV感染分子机制提供了线索及新靶标。