胃癌发生及表型分化与YAP及微环境间质纤维母细胞的关系及调控机制研究

取人肠型及弥漫型胃癌(I-GC;D-GC)组织行3D培养，分选不同表型胃癌CFAs,分别将I-GC-CAFs和D-GC-CAFs与稳定表达EGFP的胃癌细胞系EGFP-BGC823行3D共培养，分析不同表型胃癌CAFs对EGFP-BGC823细胞生物学行为的影响；将NAFs分别与I-GC和D-GC癌细胞共培养, 将I-GC-CAFs与D-GC、D-GC-CAFs与I-GC癌细胞共培养, 分析NAFs及不同表型胃癌细胞诱导的CAFs与其它表型胃癌细胞生物学行为的关系；构建YAP真核表达载体转染正常胃上皮细胞GES-1,分析转染前后GES-1的改变；构建特异性干扰YAP表达的siRNA，转染EGFP-BGC823细胞，行3DCC或与不同表型胃癌来源的CAFs共培养,分析特异性封闭YAP表达前后胃癌细胞生物学行为特性的改变，探索Hippo信号转导通路异常在胃癌发生及与CAFs互动调控的分子机制。

主要研究成果:1)成功构建了pRFP-YAP1shRNA重组质粒并转染筛选获得特异性沉默YAP1基因的胃癌细胞株pRFP-YAP1 shRNA-BGC823，体外实验证实特异性敲减YAP1可显著抑制BGC823细胞的增殖活性、克隆形成能力、细胞迁移和侵袭能力，提示沉默YAP1基因可显著抑制BGC823胃癌细胞的恶性生物学行为; 2)发现沉默YAP1基因可显著上调胃癌细胞中上皮标记物E-cadherin和αE-catenin并显著下调间质细胞标记物Vimentin和MMP9,提示沉默YAP1基因表达可抑制胃癌细胞上皮间质转化(EMT);3)发现沉默YAP1基因可明显抑制ERK1/2,PI3K-AKT, VEGF及β-catenin信号通路活性，提示YAP1可能通过调控前述信号通路进而参与胃癌细胞增殖、侵袭、转移等生物学过程; 4) 成功构建了YAP1真核表达载体并转染人正常胃粘膜上皮细胞系GES-1细胞，首次获得稳转高表达YAP1的GES1-YAP1细胞株,发现过表达YAP1的GES-1细胞α-catenin表达显著下调，提示YAP1基因可能通过下调α-catenin诱导正常胃粘膜上皮细胞启动EMT进而参与胃癌的发生,目前尚未见到类似研究报道；5)对人胃癌组织标本中EMT及微环境成纤维细胞活化情况进行了评估,发现胃癌组织中成纤维细胞特异性标志蛋白FSP1,Vimentin, α-SMA均呈现异常表达，提示胃癌相关成纤维细胞在诱导胃粘膜上皮EMT进而恶性转化过程中起重要作用; 6)采用LncRNA芯片检测分析了胃原发癌与正常胃粘膜之间差异表达的LncRNA及其相关基因.首次发现胃癌相关lncRNAs; 7)观察分析了人胃癌术后标本中YAP1,α-catenin, E-cadherin,ARHI,beclin1, p62,LC3,PPARγ,Ezein, CyPA,AEG1表达情况, 发现一些新的具胃癌早诊预警价值的Biomarkers; 8)从人术后组织中成功分离培养CAFs并开展相关体外研究. 9)培养博士7名硕士3名;发表标注本项目资助论文23篇, 其中SCI收录5篇, 参加国际会议交流11篇被SCI/ISTP收录；获得省部级科技进步二等奖一项。