白藜芦醇对胎盘滋养细胞氧化应激损伤中NLPR1炎症小体-自噬信号的影响

This research is based on an in vitro model of human placental trophoblast cells HTR-8 cell oxidative damage, by exploring the oxidative stress effect on trophoblast invasion function; whether there is excessive activation and autophagy of NLRP1 inflammasome in oxidative stress injury; and on the basis of further proof of whether there is relationship between cascade activation and excessive autophagy the phenomenon of NLRP1 inflammasome; The polyphenol compounds - Resveratrol as a oxidative stress and autophagy regulator, This study will clear the role of resveratrol on oxidative damage in human fetal trophoblast cells, and the effects of autophagy activation and inflammatory corpuscle NLRP1 and further explore the pharmacological mechanism of resveratrol.

本研究以建立人胎盘滋养细胞HTR-8建立滋养细胞氧化损伤的体外模型为基础，通过探讨氧化应激损伤对于滋养细胞侵袭功能的影响；氧化应激损伤中是否存在NLRP1炎症小体的活化及过度自噬现象；并在其基础上进一步论证NLRP1炎症小体的活化及过度自噬现象是否存在级联关系；最后将集中抗氧化应激及自噬调节剂作用为一体的天然的多酚化合物—白藜芦醇做为研究对象，明确其在人胎盘滋养细胞氧化损伤中的作用，并通过炎症小体NLRP1的活化及自噬的影响进一步探讨药理作用机制。

本项目研究旨在建立体外人胎盘滋养细胞HTR-8/SVneo滋养细胞氧化损伤模型，研究氧化应激损伤中NLRP1炎症小体的激活和过度自噬的存在。进一步证明NLRP1炎症小体的激活与过度自噬现象之间是否存在级联关系。同时探讨白藜芦醇在胎盘滋养细胞氧化损伤中的作用。在HTR-8/SVneo细胞中加入H2O2 3h后，检测ROS水平和凋亡水平、NLRP1炎症小体及自噬的表达。加入白藜芦醇后，检测ROS水平和凋亡率，炎症小体及自噬的表达。以NLRP1特异性激活剂(MDP)为阳性对照，检测H2O2作用后滋养细胞中LC3-II和Beclin-1的表达，并与正常滋养细胞中自噬蛋白比较，判断是否存在过度自噬。通过RNAi干扰滋养细胞中NLRP1基因的表达，通过检测细胞中ROS及自噬的产生对NLRP1炎症小体的依赖性，来确定氧化应激及自噬在NLRP1依赖性炎症反应中的作用。300μmol/L H2O2作用3h是建立氧化应激损伤模型的最佳组合 (P<0.01)，细胞凋亡率增加 (P<0.01)，炎症小体及自噬相关蛋白表达水平较高 (P<0.01)。人胎盘滋养细胞发生氧化应激时，NLRP1炎症小体及自噬相关蛋白蛋白表达升高 (P<0.01)，MDP的加入可改善其改变 (P<0.01)，siRNA-NLRP1中炎症因子及自噬相关蛋白蛋白表达降低 (P<0.01)。滋养细胞在氧化应激下出现NLRP1蛋白表达和过度自噬，且NLRP1炎症小体的激活与过度自噬存在级联反应。白藜芦醇(50μmol/L)处理8 h可改善H2O2引起的氧化应激损伤，提高细胞存活率 (P<0.01)，降低NLRP1炎症小体及自噬相关蛋白表达 (P<0.01)，减少细胞凋亡，从而保证滋养细胞的正常生物学功能。