海南特有龙脑香科植物内生真菌资源及其生理生化特性研究

本项目拟在课题组较多相关科研积累的基础上，利用我校先进的科研支撑条件，采用更先进的微生物学、生态学、分子生物学、药理学以及化学的相关技术与方法，进一步系统、深入地研究我国海南地区特有龙脑香科植物坡垒、无翼坡垒和青梅居群中内生真菌的分布情况和生物多样性特征，并对各植物组织代表性菌株的次生代谢产物进行生理生化特性研究和活性筛选，从而掌握我国海南地区龙脑香科植物内生真菌资源的大致情况，揭示内生真菌与居群环境之间的可能关系，并探讨内生真菌培养物中新型活性物质存在的可能性。该研究不仅可为海南岛产区外的大规模引种栽培和疾病防治提供科学指导，而且为拓展内生真菌资源的利用价值奠定科学基础，具有较大的潜在经济效益和社会效益；同时也有助于拓宽植物学、微生物学、生态学等相关学科的研究领域，促进这些学科的发展。

已按计划完成，并增加了其它来源的微生物代谢产物研究，取得了阶段性结果。共发表SCI论文16篇，核心期刊2篇，专利6项，4项已授权。夏季从坡垒根、茎、叶中共分离获得68株内生真菌，20株内生放线菌；从无翼坡垒根、茎、叶中共分离获得56株内生真菌，17株内生放线菌；从青梅根、茎、叶中共分离获得45株内生真菌，10株内生放线菌。从已有结果看根、茎、叶中内生真菌存在生态分布差异，为探讨内生真菌在三种植物中的分布差异，对春、夏、秋、冬四季分别采样进行分离。共四次采样分离龙脑香科植物进行内生真菌分离，共分离得到689株真菌，并对200株代表性菌株进行了发酵产物点板（TLC层析板）、氢谱测定，从中选出10株进行50升发酵产物提取、分离、结构鉴定及活性测试研究，已完成6株真菌代谢产物的研究。对本实验室分到的14株链格孢属真菌进行了RAPD分析，以期获得快速准确的分子鉴定方法，为后续的活性筛选及代谢产物研究提供理论研依据。对草茎点霉Phoma herbarum YS4108多糖合成相关基因的克隆成功克隆了内源性actin启动子，验证其可在P. herbarum中启动外源基因表达，成功克隆了P. herbarum YS4108的UGDH全长cDNA，构建了该基因的超表达和RNAi载体。对Streptomyces seoulensis采取正常的高氏培养基培养得到一新大环内酯化合物deminamicin，对厌氧菌幽门螺旋杆菌有很强的抑制作用，MIC50为4.0 μg/mL。对其马丁培养基发酵产物分离纯化获得一新颖化合物汉城链霉素(streptoseomycin)，其对厌氧菌具有很强的抑制作用，且不具有细胞毒性，因此汉城链霉素(streptoseomycin)可作为一种新颖的抗生素，同时该化合物具有很强的绿色荧光，有望深入研究它的作用机制，已对其发酵条件进行优化为深入研究该化合物的抗菌作用机制做准备。对一株曲霉代谢产物进行发酵条件优化，在原有研究基础上集中考察了对fumigaclavine C产量有显著性影响的作用因子，并通过响应曲面法（RSM）进行了互作分析，确定了最佳发酵条件。从一株密叶苔草内生真菌(Alternaria sp.)固体发酵物中提取到具有抗肿瘤作用的新交链孢菌生物碱（alternarlactam），并利用化学合成的方法生产获得该生物碱。