Wnt通路重要成员基因突变与甲基化在家族性胃癌发生中的作用

Wnt signaling pathway is closely associated with the occurrence of gastric cancer(GC). We identified suspected hereditary GC patients based on either the GC family history or GC onset at early ages. We have screened germline variations in suspected hereditary GC patients at the coding sequences of APC, E-Cadherin, β-catenin, axin genes with polymerase chain reaction-denaturing high-performance liquid chromatography (PCR-DHPLC) analysis and DNA sequencing. To investigate the status of hypermethylated gene promoter. Circulating DNA from gastric cancer patients' peripheral blood was modified by sodium bisulfite. We analyzed the hypermethylation status of APC, E-Cadherin, β-catenin and axin genes by methylation specific-PCR (MSP) and DNA sequencing. Statistical comparisons of mutations distribution between GC patients and healthy individuals were performed using Fisher's exact test with a criterion of P < 0.05. Odds ratio (OR) and the corresponding 95% confidence interval (95% CI) for the association were estimated. We try to provide evidences for clinical treatment and evaluation of prognosis by investigate their possible role in familial GC.

Wnt信号转导通路异常同胃癌的发生密切相关。我们联合应用变性高效液相色谱（denaturing high performance liquid chromatography，DHPLC）技术和DNA序列分析对有胃癌家族史或胃癌发病年龄低于50岁的胃癌患者Wnt通路中重要成员APC,E-Cadherin,β-catenin,axin基因胚系突变进行全基因筛查。同时，为寻找简便、快捷、微创的检查方法，我们用甲基化特异PCR(methylation specific-PCR, MSP)方法检测遗传性胃癌患者外周血中总循环DNA（包含游离DNA和细胞表面吸附DNA）异常甲基化水平。通过对检测结果进行统计学分析，探讨Wnt通路相关基因突变及启动子区异常甲基化之间关系，以及它们在家族性胃癌发生中的作用，为肿瘤的早期诊断、治疗及预后的判断提供重要依据。

胃癌是我国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，要提高胃癌的治愈率和五年生存率,重在早期发现、早期诊断。肿瘤发生的早期阶段，外周血循环肿瘤核酸中可检测到与肿瘤细胞一致的基因突变。血清肿瘤标志物检测具有无创、标准化等特点，为肿瘤的早期诊断和治疗提供了新的研究方向和领域。外周血循环DNA甲基化标志物是研究的热点，由于循环DNA在血浆中含量很少，传统技术难以提取高质量的循环DNA，MNPs特异地将分离技术和富集技术有机的结合为一体，可提高DNA提取效率。本研究结合纳米技术、DHPLC-DNA测序和MSP等技术对外周血中Wnt信号通路相关基因遗传特征谱进行联合检测，为胃癌的风险预测及早期基因诊断提供重要信息。结果表明：胃癌患者中发生E-cadherin异常甲基化的比例高于正常对照，低分化与中低分化胃癌患者的异常甲基化比例显著高于中分化患者（P < 0.05），溃疡型胃癌的异常甲基化检出率与非溃疡型存在显著差异（P < 0.05）。家族性胃癌患者中E-cadherin 基因Asn751Asn 检出率高于正常人群( P< 0. 05)，这种差异主要表现在高年龄组胃癌患者( P < 0. 01) 。COX-2 -765GC+CC基因型的个体在胃癌组中显著增高（OR=1.808，95％CI：1.050～3.113，P<0.05），−765C等位基因与苏北地区人群胃癌易感性增高相关(OR=1.701，95%CI=0.840~3.446，P<0.05)。BCL-2-938CC基因型的个体患胃癌的风险约是AA基因型个体的3倍，-938C等位基因在胃癌患者中检出率明显高于正常对照(73.7% vs 64.2%, P < 0.05)，是胃癌发病的风险因素。COX-2 -765CC/GC分别与BCL-2-938CC基因型在胃癌的发病风险中存在着明显的加乘交互效应，与COX-2-765GG和BCL-2-938AA基因型携带者相比，其胃癌的发病风险分别增高10倍和5倍，统计学差异显著，COX-2基因和BCL-2基因在胃癌的发生中有明显的协同作用。Wnt通路相关基因多态位点的存在可使携带者胃癌发病风险增高，可能是部分癌高发家族癌症发生的原因之一。检测肿瘤患者外周血中循环DNA特异性改变为肿瘤的早期诊断及病情监控提供了新的手段，并将可能为肿瘤的治疗、术后监测及预后的判断提供重要依据。