去乙酰化酶抑制剂VPA对脂肪间充质干细胞免疫调控能力的影响

Systemic Lupus Erythematosus (SLE) is a autoimmunne diseases which can result in multiple organ distruction with autoantibodies. The pathogenesis is very complex. In current study, mesenchymal stem cell (MSC) has been shown to be positive effect in the treatment of auto-immune diseases. In the study of mesenchymal stem cells in gene expression profiles compared lupus patients and normal individuals，Scientists found that the gene on immune modulation has been down regulated in Mesenchymal stem cells of lupus patients, because MSC can secret a number of cytokines to suppress immune response such as TGF-β,VCAM-1,PGE2,etc，and deacetylase inhibitors may be effective to improve the histone acetylation levels, so This study will use deacetylase inhibitor Valproic Acid (VPA) to treat ADSCs，then obsreve whether VPA can change the epigenetic imprint of ADSCs and activate gene expression in immune regulation to improve therapeutic effect of ADSCs to lupus disease.

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus SLE）是一种由多种自身抗体及免疫复合物引起多器官损伤的自身免疫性疾病，其发病机制较为复杂。近年来，有研究提示间充质干细胞（MSC）在治疗自体免疫性疾病中有着较理想的效果。在对比红斑狼疮患者和正常个体间充质干细胞基因表达谱的研究中发现，红斑狼疮患者间充质干细胞的免疫调控相关基因发生了下调。由于MSC是通过分泌一些细胞因子例如TGF-β、VCAM-1、PGE2等来抑制免疫反应，而去乙酰化酶抑制剂可以有效的改善组蛋白的乙酰化水平。因此，本研究拟利用去乙酰化酶抑制剂Valproic Acid (VPA)来处理脂肪间充质干细胞，研究VPA是否可以改变ADSCs的表观遗传学印记--H3K4和H4K5组蛋白乙酰化水平，最终激活与免疫调控相关基因的表达，从而改善ADSCs对红斑狼疮疾病的治疗效果。

系统性红斑狼疮（ Systemic Lupus Erythematosus， SLE） 是一种由多种自身抗体及免疫复合物引起多器官损性自身免疫性疾病。近期的研究发现，狼疮患者的巨噬细胞在细胞因子分泌、细胞表面标记物表达、细胞亚群转化，以及对凋亡细胞的吞噬能力都发生了异常的改变，可能是导致自身免疫性疾病的起始性因素。另一方面，间充质干细胞的免疫调控能力和低免疫原性都得到了证实，在对狼疮患者进行MSC移植后可以有效的缓解病情，但MSC是如何作用于自身免疫性疾病患者的巨噬细胞，却鲜有证据。在既往的研究中，发现巨噬细胞的极化状态和其组蛋白修饰具有显著的相关性，因此在本研究中通过构建巨噬细胞极化诱导体系，并最终测定组蛋白H3K9和H4K5的乙酰以及H3K9和H3K27的甲基化状态，分析巨噬细胞极化与组蛋白修饰的可能的潜在关系。不仅如此，我们还在利用组蛋白乙酰化抑制剂VPA处理极化过程中的巨噬细胞，检测巨噬细胞特征性的细胞因子的分泌和组蛋白H3和H4的修饰状态，从另一个角度证明巨噬细胞的极化是否和其组蛋白的修饰具有相关性。此外，在本实验中通过transwell培养体系将脂肪间充质干细胞与巨噬细胞进行非接触型共培养，发现脂肪间充质干细胞（ADSC）可以抑制巨噬细胞的免疫反应，并通过测定巨噬细胞在共培养后的特征性的细胞因子分泌、细胞表面标记以及组蛋白修饰状态，进一步分析间充质干细胞是否可以通过改变巨噬细胞的组蛋白修饰状态进而发挥其免疫调控的作用。从而从另一个角度诠释间充质干细胞的免疫调控机制。最终，通过测定巨噬细胞极化状态的组蛋白修饰状态测定和VPA处理极化巨噬细胞组蛋白修饰状态的测定，我们发现巨噬细胞的组蛋白H3K9的乙酰化状态和炎性因子的分泌具有相关性，而且我们发现VPA可以通过促进巨噬细胞H3K9的乙酰化状态并促进巨噬细胞向M2型的转变。另一方面，我们通过将间充质干细胞分别与M1型和M2型巨噬细胞进行共培养后发现，ADSC可以抑制M1型巨噬细胞的相关因子的表达，并促进M2型巨噬细胞的特征性细胞因子的表达。此外ADSC还可以还在一定程度上提高了巨噬细胞H3K9的乙酰化程度，这一结论与我们在前期实验中发现的巨噬细胞抑制表型与H3K9乙酰化呈正相关这一结论相吻合。最后，在利用了MSC注射SLE小鼠后可发现，小鼠脾脏细胞中Th17细胞的数量减少以及脾脏细胞中Il-17A表达量的显著下