肿节风防护腮腺放射性损伤的作用机理研究

鼻咽癌是广西高发恶性肿瘤，放射治疗是鼻咽癌的主要治疗方法，且治愈率高。但腮腺放射损伤是放射治疗的主要并发症，严重影响患者的生活质量。肿节风又名九节茶、草珊瑚，具有清热凉血，活血消斑，祛风通络的功能。本课题组前期研究证明了肿节风对腮腺放射损伤具有一定的防护作用。本项目在此基础上，拟采用小型猪作为动物模型, 给予常规分割局部照射头颈部, 于照射前中后通过肿节风干预，分别于照射前、照射结束、及照射后第10、40、90天进行唾液流率，唾液成分的检测，同时取腮腺组织，进行腮腺组织学观察，检测腮腺细胞增殖、凋亡及活性氧簇的产生情况，以及凋亡相关基因的表达，以验证肿节风对腮腺的放射损伤的防护作用及可能的防护机制，明确肿节风防护腮腺放射损伤的靶点，为进一步的研究提供理论依据。

【主要内容】1.采用实验用巴马小型猪为实验对象，分别以单次大剂量（15Gy/1次）照射以及常规分割照射（30Gy/5次/5周）建立起肿节风干预下的腮腺放射性损伤实验动物模型，分为空白组(不做任何实验干预)、单照组(仅单纯照射)和药照组(照射的同时饲喂肿节风配方颗粒)；2.分别取照射后1天、10天、40天、90天小型猪腮腺标本进行研究：(1)用RT-PCR法及Western blotting法分别检测所取腮腺标本中的Bcl-2、Bax、P53和Caspase3 mRNA和蛋白表达的变化；(2)ELISA法检测腺体细胞内ROS的含量；(3)TUNEL法检测腮腺细胞原位凋亡；(4)免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。【结果】（1）在各个时间点，与空白组相比，单照组和药照组中Bax、P53及Caspase3的mRNA和蛋白表达水平均有所提高，三者的组间差异具有统计学意义(P<0.05)，其中单照组高于药照组； Bcl-2的表达，空白组高于药照组，药照组高于单照组，差异具有统计学意义(P<0.05)；（2）药照组ROS的含量在各个时点均低于单照组，差异均有统计学意义（P＜0.01），且在照射后10 d时肿节风对ROS的清除作用较强（P＜0.01）；(3) 在凋亡检测中我们发现：单照组与药照组在各时间点腮腺细胞凋亡率均高于空白组，与空白组相比差异均有统计学意义（P<0.01）；（4）单照组与药照组PCNA表达率在各时点均高于空白组，与空白组相比差异均有统计学意义（P<0.01）；而各时点比较，药照组PCNA表达率均高于单照组，差异有统计学意义（P<0.01）。【结论】肿节风能提高Bcl-2 mRNA及其蛋白的表达，降低Bax、P53及Caspase3 mRNA及其蛋白的表达，抑制细胞的过度凋亡，促进细胞的修复增殖；对腮腺放射损伤所产生的ROS有一定清除作用，提示清除放射所产生的ROS可能是肿节风防护腮腺放射损伤的主要机制；而电离辐射则可能通过诱导腮腺细胞凋亡而致使腮腺受损，同时机体可能通过增殖代偿以修复损伤，使用肿节风有助于降低凋亡率，促进增殖修复，从而证明肿节风具有良好的腮腺放射损伤防护作用。【意义】本研究结果为头颈部肿瘤放疗提供了一种有效的唾液腺放射防护剂，为放疗副反应的防治开辟了新的研究领域。