基于TGF-β/smad通路与表观遗传学研究半夏泻心汤含药血清对Hp感染胃黏膜上皮细胞的影响

Drug resistance and easy to recurrence of peptic ulcer with helicobacter pylori infection is urgent in clinic. Banxia Xiexin Decoction (BD) can reduce the recurrence, promote tissue recovery and healing.,But the mechanism need to be further defined.To investigate the mechanism of peptic ulcer treatment with classical formulae of BD, we study the effect of serum with BD on human gastric epithelial (GES-1) cells co-cultured with H.pylori in vitro based on TGF-β/smad signaling pathway and epigenetics. GES-1 cells were cultured, the expression of TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7 mRNA was detected by RT-PCR,the protein was detected by Western blotting and the levels of Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b、MBD1、MeCP2、Kaiso mRNA were assayed by RT-PCR after intervention of BD on GES-1 cells co-cultured with H.pylori in vitro.We hope to investigate the mechanism of Banxia Xiexin decoction in treating gastric ulcer by molecular level,then lay a foundation for developing new gastric mucosal protective agent.

伴Hp感染的消化性溃疡（PU）耐药性与易复发是临床亟待解决的问题，半夏泻心汤能促进PU愈合、减少复发,但其机制有待进一步明确。本研究从TGF-β/smad通路及表观遗传学角度,以中医经方半夏泻心汤（半夏、干姜、黄芩、黄连、人参、大枣、甘草）人的含药血清对Hp感染人胃黏膜上皮细胞（GES-1）进行干预，RT-PCR、Western Blot法检测GES-1转化生长因子β1（TGF-β1）和转录因子Smad2、Smad3、Smad7 mRNA 及蛋白表达，RT-PCR法检测DNA甲基化相关因子DNA甲基转移酶1(Dnmt1)、DNA甲基转移酶3a(Dnmt3a)、DNA甲基转移酶3b(Dnmt3b)、甲基结合区域1（MBD1）、甲基CpG结合蛋白2（MeCP2）、锌指蛋白（Kaiso）等 mRNA的表达，以期从分子水平揭示这一经方治疗PU的机制，为开发新型中药胃黏膜保护剂打下基础。

伴幽门螺杆菌（Hp）感染的消化性溃疡（PU）耐药性与易复发是临床亟待解决的问题，临床研究显示中医经方半夏泻心汤（半夏、干姜、黄芩、黄连、人参、大枣、甘草）能促进PU愈合、减少复发。本课题从TGF-β/smad通路及表观遗传学角度,探讨半夏泻心汤人的含药血清对Hp感染人胃黏膜上皮细胞（GES-1）的干预作用，以期从分子水平揭示这一经方治疗PU的机制。本课题组首先根据纳入标准，就近年使用半夏泻心汤中西医结合治疗的随机对照临床文献中有关治愈、复发情况等内容进行Meta分析。同时通过体外实验研究首先评价半夏泻心汤含药血清对Hp感染GES-1细胞增殖的影响；其次明确了半夏泻心汤含药血清对细胞TGF-β/smad信号通路相关因子表达的影响；最后明确了半夏泻心汤含药血清对细胞DNA甲基化相关因子表达的影响。结果：①1964 名患者纳入Meta分析，使用中西医结合治疗组优势明显，与单纯西药治疗对照组的治愈率及复发率相比均有统计学意义，P＜0.01。②24h、48h、72h时间节点，中药组细胞数明显高于模型组、用药前组、西药组（P＜0.01）。③经含药血清干预72h，中药组细胞中TGFβ1、Smad3 mRNA表达水平较模型组、用药前组明显降低（P＜0.01，P＜0.05），p-Smad3 蛋白表达水平较模型组明显降低（P＜0.05）。④中药组细胞中Smad7 mRNA与蛋白表达水平较模型组明显增加。⑤用药前组MECP2 mRNA与中药组比较有显著性差异（P＜0.05)。⑥MBD1、DNMT3A、DNMT3B 等mRNA表达水平在实验各组之间没有显著性差异。结论：①对PU患者采用中西医结合治疗较单纯西医治疗具有疗效更好、不良反应更少的趋势。②Hp可抑制胃黏膜上皮细胞的增殖，半夏泻心汤可以抵御Hp的影响，促进细胞的增殖。③半夏泻心汤可通过调节TGF-β/smad信号通路中TGFβ1、Smad3、Smad7等因子表达而发挥作用。④半夏泻心汤可通过下调或抑制MECP2 mRNA 表达从而参与细胞DNA甲基化调控。