基于肿瘤相关巨噬细胞转化探讨抗癌方剂化癥散积颗粒通过多靶点作用影响肿瘤微环境机制的研究

Primary hepatocellular carcinoma with rapid proliferation, invasion and metastasis of various clinical manifestations of multifocal. Chemotherapy has a negative effect, make the body start the repair mechanism of macrophage damage resistance, suggesting that therapeutic strategies for HCC need multi angle and multi targets. Our previous work demonstrated Huazheng Sanji Granule could inhibit the liver cancer cell DNA synthesis, promoting tumor cell apoptosis, inhibit tumor growth, and increased IL-2 and IL-3, suggesting that it can improve immune function. Therefore, we believe that Huazheng Sanji Granule may be regulating tumor associated macrophage function and reduction of macrophage to M2 type conversion; inhibit the formation of vasculogenic mimicry, play the anti invasive effect. The tumor microenvironment change may be the result of Huazheng Sanji Granule. To test this hypothesis, the establishment of macrophages and HepG2 cells in three-dimensional culture system, observation of vasculogenic mimicry, the invasion and migration ability, identification of macrophage phenotype; establish HepG2 tumor bearing mice model, the observation of hypoxic micro environment of tumor type M2 macrophages change and explain Huazheng Sanji Granule increased sensitivity to anticancer drugs and reduce the toxicity mechanism, is a compound preparation of traditional Chinese medicine in the treatment of liver cancer provides new ideas.

原发性肝癌具有快速增殖、侵袭、多灶转移等多样临床表现。化学药物治疗又有负面效应，使机体启动巨噬细胞损伤修复机制产生耐药，提示肝癌需要多角度多靶点的治疗策略。本课题组前期工作证实化癥散积颗粒具有抑制肝癌细胞DNA合成，促肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤生长等作用，同时具有增高IL-2、IL-3，提示有提高免疫功能作用。因此，我们认为抗癌方剂化癥散积颗粒可能通过调节肿瘤相关巨噬细胞功能，减少巨噬细胞M2型化；通过抑制血管生成拟态形成发挥抗侵袭作用。表明肿瘤微环境的改变可能是化癥散积颗粒多层次、多靶点作用的综合结果。为了验证这个假设，建立巨噬细胞和HepG2细胞三维立体共培养体系，观察血管生成拟态，侵袭和迁移能力情况、鉴定巨噬细胞表型；建立HepG2荷瘤小鼠模型，观察缺氧微环境肿瘤组织M2型巨噬细胞的变化，阐明抗癌方剂化癥散积颗粒增加抗癌药物敏感性、减少毒副作用的机制，为中药复方制剂治疗肝癌提供新思路。

原发性肝癌具有快速增殖、侵袭、多灶转移等多样临床表现。化学药物治疗又有负面效应，使机体启动巨噬细胞损伤修复机制产生耐药，提示肝癌需要多角度多靶点的治疗策略。本课题组前期工作证实化癥散积方具有抑制肝癌细胞DNA合成，促肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤生长等作用，同时具有增高IL-2、IL-3，提示有提高免疫功能作用。因此，我们在细胞实验中上探讨了化癥散积方联合顺铂具有协同抑制肿瘤的侵袭、迁移能力的作用机制，通过调节肿瘤相关巨噬细胞功能，促进巨噬细胞M1型化，减少巨噬细胞M2型化，进而抑制血管生成拟态形成发挥抗侵袭作用，降低HIF-1α、VEGF、Vinmentin、MMP2/9、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达，增高E-cadherin蛋白的表达；化癥散积方通过调节Bax、Bcl-2、Caspase-3、HIF-1α、Vinmentin、E-cadherin的表达，协助增效顺铂的抗肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力，促进凋亡的作用，但在VEGF蛋白的表达趋势中未见到增效作用。动物实验则显示化癥散积方和顺铂均具有抑制肿瘤生长作用，但不具有协同增效作用，却具有协同抑制侵袭和迁移的作用；化癥散积方能够抑制肿瘤生长，抑制血管生成拟态的形成，这与其促进M1型巨噬细胞和降低M2型巨噬细胞的表达，增高E-cadherin，降低HIF-1α、VEGF、Vinmentin、MMP2/9、EGF的表达关系密切，与顺铂联合应用时具有联合增效的效果，但在EGF和IGF-1蛋白的表达趋势中未见到增效作用。顺铂本身不具备调节肿瘤相关巨噬细胞的能力，但二者联合应用时可起到协同增效作用。以上研究有助于开发新的治疗策略。