灰树花GZD－032菌株发酵转化中药及其增效机理的研究

在前期研究中，本课题组以灰树花GZD-032菌株液体发酵天麻，制得灰树花发酵中药培养液，其抗肿瘤活性明显高于纯灰树花发酵液、天麻提取液、纯灰树花菌发酵液加天麻提取液。对灰树花菌发酵天麻培养液成分进行初步分析表明，与天麻提取液及纯灰树花发酵液相比，转化制剂在成分上发生了很大变化。本项目拟采用活性跟踪分离法对灰树花菌发酵天麻培养液抗肿瘤作用物质基础进行系统研究，确定其单体活性成分，以揭示增效的机理；进一步分离（或外购）天麻的成分，分别在灰树花深层发酵体系中加入单一及多组分组合，以代谢组学方法研究天麻成分与灰树花发酵间的相互作用的物质变化；从而阐明灰树花发酵转化天麻的增效机理及它们间的相互作用情况，为实现药用真菌液体发酵生产与中药生物转化的结合进行中药新药(或活性化合物)的创制提供理论基础。

中药含有丰富的化学成分，利用微生物(尤其是药用真菌)对中药进行发酵，不仅可以较大幅度改变化学成分，提高疗效，降低毒副作用，而且其过程简单，成本较低，可以将中间体开发为新剂型。本研究的工作是基于微生物发酵应用于中药炮制的基础之上，其主要研究目的是运用不同相关方法、从不同角度研究天麻中的主要成分在灰树花发酵生长代谢过程中的变化，初步探明灰树花发酵转化天麻的增效机理及它们间的相互作用，为实现药用真菌发酵生产与中药生物转化的结合进行中药新药(或活性化合物)的创制提供理论基础。实验结果从发酵动力学、代谢组学等不同角度分析都表明天麻提取物的加入对灰树花深层发酵具有促进作用和增效作用。实验表明，未经硫磺熏过的天麻醇提液，其体积浓度为5 % (v/v)时，最能促进灰树花菌丝体的生长和胞外多糖的合成；实验发现，天麻的主要成分对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛是天麻提取物中对灰树花发酵起促进的作用的关键成分，对羟基苯甲醛的促进作用优于对羟基苯甲醇。基于本课题获得的大量实验数据的支撑，本研究首次报道灰树花具有利用自身的细胞或酶系合成天麻素的功能，并提出灰树花同时具有转化天麻素和合成天麻素双重作用的假设。本研究还发现高温高压的作用可以改变天麻组分的含量。总之，本课题的研究方向和执行情况不仅符合中药炮制现代化的客观要求，也符合中药生产现代化和产品国际化的发展要求,最终将为中药的发展开辟新的研究领域。