基于PPARγ/TGF-β1/Samds通路探讨鼠李柠檬素改善多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢纤维化的分子机制

Polycystic ovary syndrome (POCS) is a common endocrine disease, which mostly in puberty and childbearing age women. The endocrine level in PCOS patients is closely related to the normal ovarian function and their reproductive capacity. Our previous study found that the total flavonoids form Nervilia fordii which is a traditional Chinese medicine can effectively improve the endocrine level and attenuate the metabolic abnormalities in PCOS rats. The strategies for the clinical PCOS therapies were including improve the endocrine, prevent ovarian fibrosis and restore the normal function of the ovary. The molecular study of rhamnocitrin on regulating the PPARγ/TGF-β1/Samds pathway to attenuate the ovarian fibrosis in POCS rats has been not reported in China and other countries. In this study, we first investigated the effect of rhamnocitrin in improving endocrine levels, and then investigated the activity to attenuate the ovarian fibrosis by regulating the TGF-β1/Samds pathway using a PCOS rat model. Finally, the primary ovarian granulosa cells which form rat and human were used to investigate the molecular mechanism of rhamnocitrin in PPARγ regulating the activation of TGF-β1/Samds pathway. This study will provides a certain scientific evidence for the rhamnocitrin using in PCOS prevention and clinical treatment in humans.

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种常见的内分泌科疾病，多见于青春期和育龄期女性。PCOS患者体内的内分泌水平与卵巢功能是否正常与其生殖能力关系密切。课题组前期研究发现，传统中药青天葵总黄酮能有效改善PCOS大鼠的内分泌水平及其体内代谢异常。而改善PCOS患者内分泌，防止卵巢纤维化，恢复卵巢正常功能是临床治疗PCOS的策略之一。基于PPARγ/TGF-β1/Samds通路探讨鼠李柠檬素改善PCOS大鼠卵巢纤维化的分子机制的研究尚未见有国内外的相关报道。本研究先行研究鼠李柠檬素对PCOS大鼠内分泌的改善效果。然后探讨鼠李柠檬素对介导卵巢纤维化的TGF-β1/Samds通路的调控机制。最后，分别利用大鼠源和人源原代卵巢颗粒细胞来明确鼠李柠檬素调控PPARγ干预TGF-β1/Samds通路活化的分子机制。为鼠李柠檬素在人类PCOS的预防及临床治疗中提供一定的科研依据。

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种常见的内分泌疾病。提高PCOS患者内分泌水平，预防卵巢纤维化，恢复正常卵巢功能是临床治疗PCOS的重要策略。本项目研究鼠李柠檬素对PCOS发病过程中内分泌水平紊乱的调节作用和改善PCOS大鼠卵巢和KGN细胞的纤维化作用及其分子机制，为鼠李柠檬素在人类PCOS的预防及临床治疗中提供一定的科研依据。.将雌性SD大鼠随机分为对照组、PCOS组、鼠李柠檬素治疗组和阳性对照组。阴道涂片检测和下腔静脉取血，用Elisa试剂盒检测大鼠血清中LH、FSH、E2和T水平。卵巢HE染色观察卵泡的形态结构，Western-blot和免疫组化法检测卵巢纤维化中相关因子Collagen I、CTGF、α-SMA及TGF-β1/Smads通路相关因子的表达情况。用不同浓度的DHEA处理KGN细胞48h，并用低、中、高剂量鼠李柠檬素孵育KGN细胞，Western-blot法检测PPARγ/TGF-β1/Samds通路相关因子的表达。.结果显示，经阴道涂片检测，PCOS组动情周期发生明显紊乱，PCOS模型建立成功，鼠李柠檬素可恢复正常的动情周期，用Elisa法检测血清中性激素水平，与对照组相比，PCOS组大鼠血清中T、LH、E2水平和LH/FSH比值明显升高，FSH水平明显下降，鼠李柠檬素可通过降低PCOS大鼠血清T、LH、E2水平和LH/FSH比值，升高FSH水平，改善代谢紊乱情况。鼠李柠檬素可减少PCOS大鼠闭锁卵泡数和囊性卵泡数，减轻纤维化程度，通过了Western Blot法和免疫组化法观察到鼠李柠檬素可上调PPAR-γ、Smad7，下调TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3、Smad4、Collagen，α-SMA和CTGF因子的表达。KGN细胞的Western Blot结果显示，鼠李柠檬素可下调脱氢表雄酮诱导的TGF-β，α-SMA、Collagen 1、TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3的表达，上调PPARγ的表达，证实了鼠李柠檬素对TGF-β1/Smads信号通路的调控作用。.通过我们的研究结果证明了鼠李柠檬素的干预能够改善PCOS发病过程中出现的内分泌水平紊乱，并通过调控PPARγ/TGF-β1/Smads重要通路缓解PCOS大鼠卵巢和KGN细胞的纤维化，这均表明鼠李柠檬素对于PCOS有一定的治疗作用。