正己烷对卵泡生长发育毒作用及其分子机制研究

正己烷对女（雌）性生殖系统的影响引起了人们高度的关注，尤其是对卵泡生长发育的影响。本项目通过三个方面，即：1、正己烷对卵母细胞成熟的影响，包括对卵母细胞核成熟的影响、对卵母细胞质成熟的影响（采用体外受精的方法）及对卵母细胞线粒体分布的影响（采用激光共聚焦方法）；2、正己烷对卵巢颗粒细胞孕激素合成的影响及其分子机制，包括对颗粒细胞CAMP水平的影响、对StAR蛋白表达的影响及对P450scc的影响（采用RT-PCR方法等）； 3、正己烷对卵泡细胞凋亡的影响，包括死亡受体途径的作用及Bcl-2及Bax系统的作用（采用RT-PCR方法等），研究正己烷的女（雌）性性腺毒性及其可能的分子机制，预期结果可能为正己烷的女(雌)性性腺毒性的研究及其预防和控制提供重要的理论基础和指导。

正己烷对女（雌）性生殖系统的影响引起了人们高度的关注，尤其是对卵泡生长发育的影响。本项目通过三个方面：1、正己烷对卵母细胞成熟的影响，包括对其核成熟、质成熟的影响（体外受精法）及对其线粒体分布的影响（激光共聚焦法）；2、正己烷对卵巢颗粒细胞孕激素合成的影响及其分子机制，包括对其cAMP水平的影响、对StAR蛋白表达的影响及对P450scc的影响（RT-PCR法等）；3、正己烷对卵泡细胞凋亡的影响，包括死亡受体途径的作用及Bcl-2，Bax系统的作用（RT-PCR法等），研究正己烷的女（雌）性性腺毒性及其可能的分子机制。.本项目通过体内、体外实验研究，获得以下主要结果：1、对卵母细胞成熟的影响：第一极体释放率下降；生发泡破裂率下降；卵母细胞出现早期凋亡，死亡率升高；线粒体膜电位异常；受精卵数减少。2、对颗粒细胞孕激素合成的影响：动情周期缩短；血清E2、P4无显著改变；颗粒细胞培养液E2、P4水平异常；StAR mRNA表达异常；P450scc及P450arom mRNA表达下降。3、对卵泡细胞凋亡的影响：颗粒细胞凋亡增加；Bcl-2及Xiap mRNA表达下降；Bax及FasL mRNA表达上升；NF-κB p65蛋白表达下降。4、人颗粒细胞凋亡及其调控机制研究：颗粒细胞凋亡增加；Bcl-2 mRNA及蛋白表达下降；Bax和CASPASE-3 mRNA及蛋白表达上升；颗粒细胞SHH、PTCH1、SMO和GLI1 mRNA出现改变并随时间变化而变化；颗粒细胞SHH和GLI1蛋白水平亦然。.本项目研究结果具有重要的科学意义，表明：1、正己烷可抑制小鼠卵母细胞发育成熟，表现为第一极体释放率下降、生发泡破裂率下降、死亡率升高；受精卵2细胞、4细胞数减少。其机制可能是通过影响卵母细胞线粒体膜电位，诱导其早期凋亡。2、正己烷对E2、P4水平具有影响，StAR、P450scc和P450arom基因的表达在其毒性机制中具有重要意义。3、正己烷可致颗粒细胞凋亡，Bax、FasL、CASPASE-3基因表达上调和Bcl-2、Xiap、NF-κB p65基因表达下调，可能是重要机制之一；在凋亡过程中SHH信号通路被激活，起到降低凋亡的保护性作用，可能是通过调节Bcl-2和Bax的表达改变来阻止或缓解凋亡。.本项目为正己烷的女(雌)性性腺毒性的研究及预防和控制提供了重要的理论基础和指导