长链非编码RNA XLOC_003555通过mTOR通路调控实验性自身免疫性脑脊髓炎的机制研究

Long non-coding RNAs (lncRNAs) regulates immunity function on different levels and in various cells. However, the effects of lncRNA on multiple sclerosis（MS）are still unknown. Our previous microarray analysis showed that the expression level of lncRNA XLOC_003555 in MS is significant higher compared to level of the healthy. What is more， the RT-PCR results of MS patients and EAE mice yielded the similar results. Then, we find that the inhibitor of lncRNA XLOC_003555 can attenuates EAE. According to our previous study results, we come up with the hypothese that lncRNA XLOC_003555 attenuates EAE through mTOR pathway. Our team will test the hypotheses through the methods of MRI, immunofluorescence stain, flow cytometry, Elisa, RT-PCR and Western blot, etc. The results of the investigation will provide new explanation for the pathogenesis of MS and lay a theoretical foundation for preventing and treating of MS.

长链非编码RNA(LncRNA)在多水平上和多细胞中参与免疫调节，但其在多发性硬化（MS）中的调控作用尚不明确。课题组前期LncRNA芯片结果表明：与健康人相比，MS患者外周血中多条LncRNA表达水平升高。课题组通过RT-PCR证实在MS病人及实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠外周血中lncRNA XLOC_003555均明显升高。进一步试验表明lncRNA XLOC_003555抑制剂可显著改善EAE小鼠临床症状。结合芯片技术、共表达分析等前期结果，课题组提出假说：lncRNA XLOC_003555可能通过mTOR通路参与EAE的调控。本项目拟构建EAE模型，利用磁共振、免疫荧光、流式细胞学、Elisa、RT-PCR和Western blot等技术验证假说，明确lncRNA XLOC_003555对MS的作用及调控机制。这将为探索MS的病因提供理论基础，并为MS的防治提供新视角。

长链非编码RNA(LncRNA)在多种疾病中，尤其是神经免疫病的多水平上参与免疫调节，近年其在多发性硬化（ Multiple Sclerosis, MS）中的研究越来越多，相关结果提示其在此疾病中可能发挥重要作用，但大多数LncRNA具体功能及信号通路仍然不明确。课题组在前期MS患者血清学及EAE模型LncRNA芯片技术、共表达分析和初步动物实验等研究结果的基础上，筛选并最终确定可能作用靶点lncRNA XLOC_003555，并对其在MS中的作用及可能机制进行了深入研究。首先，课题组构建实验性变态反应性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）模型，探索了lncRNA XLOC_003555对EAE小鼠临床症状、脑组织病理学的影响， 通过临床评分和病理染色，分析疾病靶器官炎症浸润情况及脱髓鞘程度；进一步，利用免疫荧光、流式细胞学、酶联免疫吸附剂、RT-PCR和Western blot等技术，探索其对EAE脑及淋巴器官内相关免疫细胞、 炎性因子谱、 T细胞增殖的影响，揭示该lncRNA的免疫调节作用；进而，探索其调控EAE的信号通路，通过RT-PCR和Western blot技术对mTOR信号通路的关键mRNA及蛋白进行检测，包括mTOR ， phospho-mTOR， 4EBP1， phospho-4EBP1，EIF4E、 cyclin-E1、 cyclin-D3和Anapc4等；并利用基因下调技术，探索EIF4E在lncRNA XLOC_003555调控EAE发病中的作用。；明确lncRNA XLOC_003555对MS的作用及调控机制。课题组探索和验证了lncRNA XLOC_003555通过mTOR相关信号通路在MS中起重要作用，研究结果可在一定角度为探索MS的病因提供理论基础，并为MS的诊断和治疗提供新思路。