基于可持续和可调控RNA干扰体系逆转食管癌细胞放射抵抗性的研究

食管癌放射治疗失败的主要原因是局部复发，推测与癌组织中放射抵抗性细胞的存在有关。前期课题组应用基因芯片，对比调查了经多次照射产生放射抵抗性的三种食管癌细胞系及其亲代细胞系的基因表达谱差异，发现了43个差异显著基因，通过Real-time PCR证实LEF1等5个基因差异尤为显著。本研究拟应用以上5个基因的特异性siRNA片段连接反转录病毒载体和可调控慢病毒载体，转导上述三种食管癌放射抵抗细胞系，建立稳定沉默靶基因的食管癌细胞系，通过Real-time PCR及Western blotting验证靶基因在细胞系中的表达差异。在细胞和动物水平观察目的基因沉默后这些细胞系与原抵抗细胞系放射抵抗性的变化，为逆转食管癌放射抵抗性提供可能的分子靶点。

食管癌放射治疗失败的主要原因是局部复发，推测与癌组织中放射抵抗性细胞的存在有关。课题组拟采用基因芯片筛查食管癌放射抵抗细胞系及其亲代细胞的基因表达谱差异，并通过慢病毒载体稳定沉默靶基因，建立稳定沉默靶基因的食管癌细胞系，比较基因沉默后细胞系与原抵抗细胞系的放射敏感性变化，拟寻找放射抵抗相关基因。.课题组应用基因芯片，对比调查了经多次照射产生放射抵抗性的三种食管癌细胞系及其亲代细胞系的基因表达谱差异，发现了 43 个差异显著基因，通过 Real-time PCR 和westernbolt证实AKR1C3 等 5 个基因差异尤为显著。课题组通过改进的HIV慢病毒（PSD31）载体建立了稳定沉默AKR1C3基因的放射抵抗食管癌细胞系（以下简称AKR1C3-shRNA），课题组进一步通过克隆形成实验比较AKR1C3基因沉默后细胞系放射抵抗性的变化，确定稳定沉默AKR1C3基因后，细胞的放射抵抗性减低；将AKR1C3过表达质粒后，发现细胞放射抵抗性增加，从而进一步确定AKR1C3基因是放射抵抗相关基因。课题组还成功建立了裸鼠模型，通过动物实验验证了AKR1C3靶基因沉默后，动物瘤体放射敏感性增加，从而进一步在动物水平上验证了AKR1C3基因是放射抵抗相关基因。课题组初步探讨了AKR1C3基因沉默后细胞放射敏感性的机制，发现AKR1C3-shRNA细胞照射后细胞内ROS水平明显高于放射抵抗细胞。