基于“脾主肌肉”理论从Wnt10b调节肌卫星细胞成脂化角度探讨健脾清化方影响IMAT的机制

Intramuscular fat (IMAT) excessive deposition can affect insulin sensitivity in skeletal muscle, IMAT main sources of adipogenic differentiation of muscle satellite cells. Wnt10b signaling pathway can regulate the process of fat into muscle satellite cells, thereby affecting IMAT deposition. IMAT can be considered a part of phlegm, and therefore, according to the theory of TCM viscera, spleen dampness may improve insulin resistance in skeletal muscle. Our previous study suggests for the rule is to Jianpihuashitang of JPQHR can improve glucose metabolism, lipid metabolism, reduce liver fat deposition, improve insulin resistance. Therefore, this study by vivo and in vitro experiments, observing the normal group, model group, JPQHR group, IMAT content Wnt signaling pathway agonist, Wnt signaling pathway inhibitor group, Wnt10b key factor signaling pathway (wnt10b, B- catenin) protein and gene expression, myoblasts / adipogenic signaling molecules (RAFs, PPARγ, EBPs, adiponectin) protein and gene expression, in order to prove ISED by adjusting wnt10b signaling pathway, inhibition of muscle satellite cells adipogenic process, improved deposition IMAT for spleen muscle theoretical treatment of diabetes to find new experimental basis.

骨骼肌肌间脂肪（IMAT）过度沉积可导致胰岛素抵抗，作为肌肉组织中的间充质干细胞 ，肌卫星细胞的成脂分化是IMAT的主要来源。Wnt10b信号通路可以抑制肌卫星细胞向脂肪细胞的分化，减少IMAT沉积。前期研究证实：健脾清化方可以调节糖脂代谢，减轻肝脏脂肪沉积，改善胰岛素抵抗。中医理论认为“脾主肌肉”，那么健脾清化方是否可以减少IMAT沉积，其调节IMAT的分子机制是什么呢？本研究拟通过体内实验，观察健脾清化方对IMAT含量，Wnt10b信号通路关键因子（Wnt10b，B-catenin），成肌（Myf5、Myod、MyoG、MRF4）/成脂信号分子（PPARγ、EBPs、脂联素）的影响，并初步探讨其机制。体外实验通过增加Wnt信号通路激动剂及抑制剂，检测上述信号分子，证明健脾清化方通过激活Wnt10b信号通路，抑制肌卫星细胞成脂分化，改善IMAT。为脾主肌肉理论治疗糖尿病提供新的实验依据。

糖尿病可导致全身多器官损伤,并进一步致残、致死，对人类的健康造成巨大危害。胰岛素抵抗是引起2型糖尿病的主要病理基础。而骨骼肌是人体最大的葡萄糖消耗器官，而骨骼肌内脂肪的异位沉积是影响骨骼肌胰岛素敏感性的重要因素。糖尿病归属中医传统理论“消渴病”的范畴。从脾论治是糖尿病的重要治则，中医藏象理论认为肌肉功能的正常发挥有赖脾功能的正常，谓之脾主肌肉。我们前期研究证实依据从脾论治理论创建的健脾清化方可改善IR、脂代谢及肝脏的脂肪沉积。本实验希望证明健脾清化方能影响IMAT的沉积，并探讨其上游机制。我们的研究通过分别体内体外实验，观测正常组、模型组、健脾清化方组、Wnt信号通路激动剂组wnt10b信号通路的关键因子（wnt10b、B-catenin的蛋白和基因表达），成肌/成脂信号分子（RAFs、PPARγ、EBPs的蛋白和基因表达），以及骨骼肌脂肪沉积水平进行了实验。体内实验表明，健脾清化方可以改善高脂喂养的ZDF大鼠腹腔胰岛素耐量和腹腔葡萄糖耐量水平，改善HOMR-IR指数。病理结果显示，模型组大鼠腓肠肌脂肪含量增加，甘油三酯含量增加，中药组均有一定改善作用。中药组对大鼠腓肠肌成脂因子PPARγ有抑制作用，对成肌因子myogenin有促进作用，对其调节因子wnt10b有一定抑制的倾向。体外实验提示，高糖培养下骨骼肌细胞内或细胞之间内甘油三酯沉积增多，成肌化减少，中药组能明显降低肌细胞内或细胞之间的甘油三酯沉积。同时中药组也能抑制成脂因子PPARγ水平，升高成肌因子myogenin水平。但对wnt10b没有明显影响。这些结果表明：根据从脾论治原则组建的健脾清化方可以有效改善大鼠糖耐量和胰岛素抵抗，其一部分机制可能与改善骨骼肌胰岛素抵抗有关。健脾清化方提高成肌相关因子myogenin，降低成脂相关因子PPARγ，提示存在增加肌卫星细胞成肌化，抑制成脂的可能，并能减少骨骼肌脂质的异位沉积，因此能改善骨骼肌的胰岛素抵抗。但其上游作用靶点不一定是wnt10b。其中机制还需要进一步进行研究。本次研究验证了从脾论治糖尿病的理论，并从脾主肌肉这一理论思想和骨骼肌胰岛素抵抗的契合点进一步探讨了健脾清化方治疗2型糖尿病，改善胰岛素的机制，为从脾论治和脾主肌肉理论在糖尿病的治疗中提供新的实验基础，并为中医药开发糖尿病治疗药物提供了新的思路。