结节病可能致病菌的检测及其在结节病和结核病鉴别诊断中的价值

Sarcoidosis is a multisystem noncaseating granulomatous disorder of unknown origin. About the association between MTB、Propionibacterium and sarcoidosis, There is no reliable evidence. Sarcoidos is similar in clinical, histological, and immunologic features to tuberculosis (TB). In clinical situation, it is often difficult to tell sarcoidosis from tuberculosis，especially when the caseous necrosis is not seen and acid-fast staining is negative in biopsy tissue. In this study, we will detect the MTB and Propionibacterium DNA in formalin-fixed and paraffin-embedded samples of sarcoidosis and TB by real-time quantitative PCR. As well,we will detect the MTB and Propionibacterium 16s rRNA in EBUS-TBNA samples of sarcoidosis and TB by RT-PCR. The diagnostic performance of qualitative and quantitative analysis of real-time quantitative PCR was assessed by receiver-operating characteristic (ROC) curves, to analysis the potential pathogenic bacterium to sarcoidosis and its value for differentiating sarcoidosis from tuberculosis.

结节病是多系统受累的非干酪性类上皮细胞肉芽肿性疾病，病因不明。关于结核分枝杆菌及丙酸杆菌感染是否为结节病病因的问题，国内外各研究均未找到可靠的证据。 由于结节病和结核病在临床、病理、免疫特点方面极为相似，临床上两种疾病的鉴别诊断困难，鉴别手段有限。本研究拟应用实时荧光定量PCR方法，分析结节病和结核病病理组织中结核分支杆菌DNA、丙酸杆菌DNA的检出情况；并 应用实时荧光定量逆转录PCR方法，检测结节病和结核病经气管镜超声引导下针吸活检（EBUS-TBNA）组织中结核杆菌、丙酸杆菌16s rRNA。研究将探讨结核杆菌和丙酸杆菌与结节病发病的相关性以及在结节病和结核病鉴别中的应用价值，并应用ROC曲线设立两种疾病鉴别诊断的定量标准，提高鉴别诊断的特异性，为临床鉴别结节病和结核病提供更为可靠的手段。

结节病是多系统受累的非干酪性类上皮细胞肉芽肿性疾病，病因及发病机制不明。本研究旨在评价结核杆菌及丙酸杆菌在结节病致病中的作用，为临床鉴别结节病和结核病提供更为可靠的手段；并初步探讨结节病患者免疫细胞及其细胞因子的表达。本研究应用实时荧光定量PCR方法检测结节病和结核病石蜡包埋病理组织中结核分枝杆菌DNA；应用实时荧光定量逆转录PCR方法，检测结节病石蜡包埋病理组织中丙酸杆菌16s rRNA；应用流式细胞术及ELISA方法检测Th17、Treg细胞及细胞因子水平。结核分枝杆菌DNA检测结果：结节病组104例，结核病组31例，对照组55例。结核病组的石蜡包埋病理组织中结核分枝杆菌阳性率及拷贝数定量结果显著高于结节病组及对照组。ROC曲线显示结核分枝杆菌DNA拷贝数鉴别诊断结节病和结核病时，cutoff值取1.14×10^3拷贝/ml，灵敏度=96.8%，特异性=98.1%，AUC＝0.994。实时定量PCR法检测石蜡包埋组织中结核分枝杆菌DNA可作为鉴别结节病和不典型结核病的方法之一，1.14×10^3拷贝/ml作为定量标准具有可靠的鉴别价值。丙酸杆菌RNA检测结果：65例结节病组中48例呈阳性结果（阳性率为73.84%），45例结核病组中4例呈阳性（阳性率为8.89％），50例对照组中3例呈阳性（阳性率为6.00％）。结节病和结核病组，结节病和对照组的阳性率有显著差异（P﹤0.001）。结节病和结核病组,结节病和正常对照组的痤疮丙酸杆菌定量结果比较差异具有统计学意义（P﹤0.001）；结节病和结核病组, 结节病和正常对照组的痤疮丙酸杆菌定量结果比较差异具有统计学意义（P﹤0.001）。根据丙酸杆菌rRNA的定量结果制作ROC曲线，取cutoff值为50.5拷贝/ml时，敏感性为73.8%，特异性为92.6%。逆转录实时定量PCR方法检测病理组织中丙酸杆菌16s rRNA对于临床上结节病的诊断及其和不典型结核病的鉴别诊断有一定的作用。外周血Th17、Treg细胞及其细胞因子检测结果：结节病组50例，对照组30例。结节病患者外周血中Th17细胞及相关的细胞因子IL-17、IL-23水平较对照组明显升高，Treg细胞相关的细胞因子IL-10的水平下调，TGF-β表达水平上调。外周血Th17/Treg比值及其细胞因子比值的偏倚参与了结节病的发病。