阿萨希毛孢子菌毒力机制的蛋白质组学研究

阿萨希毛孢子菌（T.asahii）是一种重要的条件致病菌，在环境中其致病力很弱，但在侵入宿主后，特别是在免疫力低下、免疫抑制或免疫缺陷宿主易导致致命的系统性感染，病死率很高，且对常规的抗真菌药有较强的耐药性。多个研究已经表明：细菌、真菌等微生物从环境中到活体或人体，生存环境发生了改变，其表型、生物学特性、毒力及耐药性等均会发生相应的的变化。为探索T.asahii的毒力机制，本研究分别从临床和环境中收集、分离T.asahii，筛选出高毒力临床株和低毒力环境株及小鼠体内传代前后的环境株。用比较蛋白组学方法研究T.asahii从环境到活体后蛋白的表达差异；生物信息学方法获得差异表达蛋白的编码基因，筛选出致病相关基因；用基因敲除等方法构建突变菌株，验证致病基因的致病作用。通过本研究，发现与T.asahii毒力相关的蛋白或基因，为深入了解T.asahii致病规律、开发新型抗真菌药或疫苗等提供科学依据

按计划从临床和环境中分离、收集和鉴定了12株阿萨希毛孢子菌（T.asahii）临床株和5株环境株；分别对T.asahii临床株和环境株的形态进行了观察，发现临床株和环境株在肉眼形态、光镜下形态及电镜下形态均有明显差异，这对鉴定的T.asahii的来源及对其致病性的研究有重要意义；进一步研究了三种氧化剂（H2O2、二酰胺、甲萘醌）对T.asahii临床株和环境株形态的影响和杀伤作用，发现这三种氧化剂对T.asahii均有不同程度的杀伤作用，甲萘醌杀伤作用最强，H2O2最弱，二酰胺居中。还发现氧化剂在杀伤T.asahii的过程中，其形态也发生了明显的变化，这些对研究T.asahii的感染防控及感染机制有重要意义；又分别测定了临床株和环境株的体外药物敏感性和致病性，不仅筛选出了高毒力株、低毒力株，还发现临床株的致病性高于环境株。体外药敏提示：临床株和环境株对大多数抗真菌药如卡泊芬净、氟胞嘧啶、两性霉素B均耐药，但对唑类药物环境株更敏感，这些对研究T.asahii的致病机制、耐药机制及临床用药均有重要指导意义。由于要进行蛋白质组学研究没有全基因组序列难以进行后续的差异蛋白编码基因分析，也难以进行后续的功能研究，因此课题进行了如下调整：首先测定了阿萨希毛孢子菌标准株和环境株的全基因组序列，然后再进行蛋白质组学研究，目前全基因组序列已经破译。上述工作已发表文章12篇，其中SCI 4篇，中文论著5篇，综述3篇，待发表文章2篇。参与申报省部级一等奖1项。