OSW-1对肝癌的治疗及影响肿瘤细胞信号传导的机理研究

肝癌严重威胁人类健康。虎眼万年青皂苷（OSW-1）靶向性作用于癌细胞线粒体诱导凋亡，在凋亡过程中Ca2+代谢异常、Bcl-2裂解、线粒体内产生的ROS均参与癌细胞凋亡发生、发展。但对于OSW-1具有很强的广谱的抗恶性肿瘤细胞作用，而对正常细胞没有毒性的原因尚不清楚；OSW-1作用于肿瘤细胞线粒体靶向位点尚不清楚；OSW-1靶向诱导肿瘤细胞凋亡中线粒体相关信号通路中调控因子及mtDNA基因编码间关系尚待进一步深入研究。本课题在前期研究的基础上构建mtDNA缺失的肝癌细胞株p0SK-Hep1并转染线粒体编码的COXⅠ至p0SK-Hep1成pRCOX I- p0SK-Hep1，从mtDNA基因编码、凋亡调控因子、信号通路相关因子及毒理与药物耐受基因等方面及相互间关系研究上述待解决的问题。为临床提供高效低毒的抗肿瘤药物提供理论基础，从基因水平为肝癌的预防、诊断及治疗提供理论依据。

OSW-1是由虎眼万年青根茎中提取出来的胆甾烷皂苷家族的一员并证实对多种恶性肿瘤细胞有细胞毒性而对正常细胞无明显影响。OSW-1可以导致线粒体膜电位改变，细胞内钙增加从而激活钙依赖性凋亡。而其作用于线粒体DNA缺失的白血病C6F细胞无凋亡现象，故OSW-1有靶向性作用于线粒体DNA而起到抗癌作用。本课题首先进一步探索OSW-1的抗癌机理，发现OSW-1通过血管生成，细胞极性和细胞粘附等因素及WNT、MAPK、VEGF、P53和线粒体通路诱导肝癌细胞凋亡。在此基础上，建立线粒体DNA缺失的肝细胞模型ρ0SK-Hep1并通过生长营养缺陷试验及COX I、COX II片段的PCR扩增进行鉴定模型制备的成功。比较SK-Hep1和ρ0SK-Hep1与OSW-1作用后在PI3K、MAPK及线粒体通路中的变化。研究发现：1.OSW-1和线粒体DNA缺失均能改变SK-Hep1细胞信号转导通路基因的表达，从而影响肝癌细胞的生长、繁殖、及凋亡。2.线粒体DNA缺失能改变SK-Hep1细胞信号转导通路基因的表达，对肝癌细胞的生长、繁殖具有促进作用。3. OSW-1靶向作用于SK-Hep1细胞的线粒体DNA，抑制其功能，进而抑制肝癌细胞的生长、繁殖、促进细胞凋亡。4.OSW-1在不杀灭ρ0SK-Hep1的基础上影响其信号传导通路。此发现可以为进一步明确OSW-1如何规避正常细胞而靶向性杀灭肿瘤细胞提供重要线索，为人类提供更安全而有效的抗癌药提供理论依据。