Beclin 1介导的细胞自噬在肝脏免疫耐受中的作用机制研究

细胞自噬是存在于大部分真核细胞中的稳态机制，不但与细胞凋亡、更新密切相关，还通过参与抗原递呈，在免疫炎症反应中发挥着重要作用。但细胞自噬是如何参与抗原递呈的分子机制、如何调控免疫细胞活化及其在移植排斥发生、发展中的作用尚不明了。前期试验已经观察到肝移植后的自噬功能与移植物功能损害相关。本课题拟研究Beclin 1分子在肝脏巨噬细胞自噬中的作用。通过分离肝脏巨噬细胞，体外研究Beclin 1的上调或缺陷表达对细胞自噬水平的影响，分析Beclin 1对自噬/溶酶体激活途径、PI3K-AKT-mTOR信号通路的调控作用，探讨自噬的调控对巨噬细胞处理、MHCⅡ类分子荷肽递呈抗原的能力以及对T细胞抗原反应性的影响；以同种大鼠肝脏移植为模型，观察抑制Beclin 1调控相关通路对移植排斥产生的影响，为进一步认识自噬在肝移植排斥中的调控作用、寻找通过干预自噬更有效防治肝脏移植排斥反应提供实验数据。

我们的研究工作按原定计划进度正常进行，并在其基础上做了增补，除了完成抑制自噬后将大鼠肝脏移植给野生型受体会减轻移植排斥反应相关方面研究，还研究了抑制自噬在肝脏肿瘤治疗等方面的影响，主要研究任务如下：（1）抑制自噬后将大鼠肝脏移植给野生型受体会减轻移植排斥反应。本课题采用SD大鼠肝脏巨噬细胞原代培养作为细胞体系，并针对Beclin-1设计腺病毒载体和siRNA，证实了Beclin-1上调或被抑制的效果。体外试验探讨增强或抑制大鼠肝脏巨噬细胞的自噬对其表型和分泌功能的影响。结果显示，静默Beclin-1，可以减少大鼠肝脏巨噬细胞的吞噬能力和共刺激分子CD40的表达，促进IL-10的分泌，抑制同种混合淋巴细胞的增殖能力，同时降低大鼠肝脏巨噬细胞对同种抗原细胞毒性T淋巴细胞杀伤能力。体内试验部分，研究结果发现结果显示供-/受w生存期没有显著提高，供-iv/受w生存期平均提高了21天。这部分结果正在整理撰写论文中。（2）抑制自噬可以增强抗血管生成药物对肝癌的治疗效果。我们对此在肝癌中进行了研究。研究发现，贝伐单抗在抑制肝癌细胞移植瘤中血管生成和肿瘤生长的同时，会促进肝癌细胞自噬的激活。而抑制自噬显著地促进了缺氧缺营养条件下的肝癌细胞的凋亡并抑制其增殖。化疗药物能够使肝癌细胞激活自噬，而抑制自噬促进了化疗药物诱导的肝癌细胞凋亡。而且抑制自噬能够抑制化疗药物处理后的肝癌细胞的克隆形成。本课题首次通过分析Beclin 1的调控对肝脏巨噬细胞自噬的影响，对细胞自噬在肝脏免疫耐受及肿瘤相关疾病的调控作用有一个初步探索。同时明确抑制Beclin 1等自噬相关通路对移植排斥及肝脏肿瘤疾病治疗的影响，为寻找通过干预自噬更有效防治肝脏移植后排斥与肝癌原发病复发的诊治提供了实验数据。本课题已培养研究生3名，相关SCI文章正在整理投稿中。