新促癌lncRNA KASRT调控KLF6-WT / SV1的平衡促进骨肉瘤转移的功能及分子机制研究

Osteosarcoma is one of the most common types of primary bone malignancies, and its metastasis is regulated by numerous factors. Based on previous research of the KLF6 gene function and alternatively spliced transcripts isoforms KLF6-WT /KLF6-SV1 balance, we propose the hypothesis that lncRNA KASRT exert its function of regulating the isoforms balance via direct binding the splicing factor SRSF1 which result in the relative high expression of KLF6-SV1and low expression of KLF6-WT. The imbalance of KLF6-WT/KLF6-SV1 triggers osteosarcoma cells proliferation and migration which promotes osteosarcoma metastasis .In the following study, we intend to explore the function of KASRT in the balancing of KLF6-WT/KLF6-SV1, study related mechanism how KASRT binds to SRSF1 and evaluate the role of KASRT as biomarker. The research would provide potential target and basis for the precision therapy of osteosarcoma.

LncRNA如何调控骨肉瘤转移尚待揭示。申请者根据对KLF6基因不同转录本（WT/SV1）对骨肉瘤转移功能和分子机制探索的预实验结果，提出科学假说：lncRNA KASRT通过靶向KLF6剪切因子SRSF1调控KLF6的可变剪切，即高表达的KASRT促使KLF6更多剪切出促癌转录本KLF6-SV,而降低抑癌转录本KLF6-WT，导致KLF6-WT/SV1表达失衡下降，最终促进骨肉瘤发生恶性转移。在后续研究中，我们拟从细胞、动物和临床三个水平探索KASRT在骨肉瘤转移中的功能及对KLF6-WT/SV1的平衡影响作用；通过RIP-seq、RNA pull down等平台阐明KASRT对SRSF1的调控方式和两者结合结构域/序列；评估KASRT与骨肉瘤转移和预后的相关性。本研究对新促癌lncRNA KASRT与骨肉瘤转移关系的研究将为骨肉瘤的精准治疗提供了新的潜在靶点和理论基础。

本研究整体按照原计划执行，在部分研究内容稍作调整。（1）明确Lnc-KASRT在骨肉瘤增殖和转移中的体外作用。（2）探索Lnc-KASRT调控SRSF1介导的KLF-6-WT/KLF-6-SV1表达的体外作用。（3）探索Lnc-KASRT调控骨肉瘤增殖和转移的体外机制。（4）明确Lnc-KASRT在骨肉瘤增殖和凋亡中的体内作用。（5）明确Lnc-KASRT体内对骨肉瘤转移的作用。（6）探索Lnc-KASRT体内对于SRSF1介导KLF-6-WT/KLF-6-SV1表达的调控作用。（7）在Lnc-KASRT调控骨肉瘤增殖、转移的分子机制研究和Lnc-KASRT对KLF-6-WT/KLF-6-SV1表达调控研究中，采用在骨肉瘤细胞系中进行KLF-6-SV1挽救实验来完成，与原计划稍有不同。（8）评估Lnc-KASRT作为病人转移独立因子研究未进行。未在骨肉瘤病人中进行Lnc-KASRT表达量检测及单因素、多因素分析。本次主要完成了以下研究：（1）完成Lnc-KASRT与骨肉瘤细胞系（U-2OS、Saos-2）增殖、凋亡、迁移、侵袭等相关的细胞生物学研究；（2）完成Lnc-KASRT促进骨肉瘤增殖、转移的裸鼠成瘤研究；（3）完成Lnc-KASRT促进骨肉瘤增殖、转移的分子机制研究；（4）完成Lnc-KASRT对于KLF-6-WT/KLF-6-SV1表达调控的机制研究。