松材线虫伴生细菌的分离鉴定及与宿主互作的分子机制

松材线虫病是一世界性的检疫性病害。在我国已经造成了巨大的经济、生态损失，严重影响森林生产和生态安全。申请人在前提研究探索中，从松材线虫上分离获得了一株芽胞杆菌，该细菌参与松材线虫病发生过程。单独接种细菌或者单独接种无菌线虫，松针无病害表现或者病害发生过程大幅度减缓。本项目拟在现有的基础上，系统分析浙江森林松材线虫病发病疫区松材线虫的伴生细菌，明确伴生细菌在松材线虫病发病过程中的功能，对现有的松材线虫伴生细菌种类及生态位等方面的数据进行补充；同时确定伴生细菌在松材线虫上的显微定位，分析其对线虫的生态效应；建立细菌与松材线虫互作模型，选择细菌环境调控适应因子RpoB，从分子水平揭示细菌与线虫互作过程中的遗传基础，从中探究松材线虫微生态环境下的互作基础。

本项目摸索了线虫最佳保存条件，确定了线虫可以在-80℃下的冷存，保证了线虫虫源的及时获得；确定了分离获得的松材线虫在马尾松上的致病性；从线虫体内及体表分离获得了细菌，并完成了鉴定；系统分析了松材线虫的微生态区系，从分子生态学水平揭示了松树感染松材线虫后，其周围的微生物种群结构产生了改变，验证了松材线虫通过诱导松树死亡，提高树体内的生态多样性来维持其在松树体内的存活；明确了在松材线虫致病过程中的种群密度发生变化的细菌；分析了分离获得的细菌对松材线虫的毒性，对松材线虫具有毒杀效果的细菌的筛选，发现苏云金芽孢杆菌对松材线虫具有明显的致死作用；针对Bacillus cereus 1N21开始了与松材线虫互作的研究；完成了B. cereus 1N21的突变体构建；确定了plcR在细菌与松材线虫互作中的功能。