INSL5诱导鼻咽癌TAM及促进肿瘤转移的机制

Metastasis and relapse are the primary cause of treatment failure in nasopharyngeal carcinoma. The key point to improve curative effect and prognosis is to identify the exact mechanism of metastasis. With the financial support by Natural Science Foundation of China (No. 81102053), we observed that INSL5 was over expressed in nasopharyngeal carcinoma and its expression was correlated with the clinical stages and distant metastasis. Furthermore, we found that INSL5 could improve the clone formation and invasive ability of nasopharyngeal carcinoma cells in vitro. In addition, the reduced expression of IFN-γ and enhanced expression of IL-10 in macrophage treated by INSL5 were observed and the culture medium could enhance the malignant phenotype of nasopharyngeal carcinoma cells. Taken together, we suppose that INSL5 might promote the metastasis of nasopharyngeal carcinoma by direct and indirect mechanism (inducing tumor associated macrophage transform). To verify it, we will first confirm the direct effects on epithelial-mesenchyme transition (EMT) and metastasis of nasopharynx epithelium cells and nasopharyngeal carcinoma cells induced by INSL5. And then, we will investigate whether INSL5 could induce macrophage transform to TAM and promote the metastasis of NPC. Finally, we will try to clarify the underlying mechanisms and provide a new strategy for the research of nasopharyngeal carcinoma.

转移与复发是鼻咽癌治疗失败的主要原因，明确其转移的确切机制是提高疗效和预后的关键。在国家自然科学基金项目（81102053，博士后小额）资助下，我们发现胰岛素样多肽5（INSL5）在鼻咽癌组织中高表达，其表达与临床分期及远处转移密切相关；同时体外实验证实INSL5可增强鼻咽癌细胞的克隆形成和侵袭能力；进一步观察发现INSL5处理后巨噬细胞IFN-γ表达降低，而IL-10的表达增强，且其培养液可增强鼻咽癌细胞的恶性表型。据此推测INSL5可能通过直接和间接（诱导TAM转化）两种机制共同参与鼻咽癌的转移进程。为此，本项目拟首先明确INSL5对鼻咽上皮细胞和鼻咽癌细胞生物学行为的直接影响；继而证实INSL5是否诱导巨噬细胞向TAM转化并促进肿瘤转移；最后深入探讨INSL5发挥作用的可能途径。初步阐明INSL5在鼻咽癌TAM和促进肿瘤转移中的作用及其分子机制，为鼻咽癌转移机理的研究提供新的思路。

转移与复发是鼻咽癌治疗失败的主要原因，明确其转移的确切机制是提高疗效和预后的关键。目前认为，鼻咽癌多种因素包括EB病毒感染、原癌基因和抑癌基因的突变、环境致癌因素以及免疫逃逸等可能在鼻咽癌的发生、发展与转移过程中发挥了重要作用，但其确切机制仍不十分明确。本项目主要探讨分泌蛋白INSL5在鼻咽癌发生发展中的作用和调控机制。首先我们对INSL5 在鼻咽癌发生发展中的作用进行了初步探讨，结果显示，INSL5 在鼻咽癌组织中呈高表达，且其表达与鼻咽癌的临床分期和转移有关。进一步实验发现，INSL5 可增强鼻咽癌细胞的克隆形成和体外侵袭能力。而通过干扰INSL5的表达同样说明INSL5能够促进鼻咽癌的发生发展。在体外裸鼠成瘤实验中，我们证实INSL5过表达细胞株具有较强的成瘤特性。另一方面，我们发现INSL5可通过促进鼻咽癌细胞株对糖酵解抑制剂的敏感性，并激活AKT/ERK/c-Myc信号通路葡萄糖转运子等从而促进葡萄糖的吸收，最终促进鼻咽癌的发生发展。以上结果共同说明INSL5可直接作用于鼻咽癌细胞促进鼻咽癌的发生发展。.此外，我们首次发现EB病毒裂解期相关基因之一BZLF1可以显著上调INSL5的表达，并且二者在鼻咽癌组织的表达具有良好的正相关。随后荧光素酶实验和Chip实验证实BZLF1通过结合INSL5启动子c-Jun序列促进INSL5的表达，说明在EB病毒促进鼻咽癌的发生发展过程中INSL5同样起着重要的作用。另外，我们观察到INSL5的受体GPCR142与鼻咽癌组织中的巨噬细胞存在共表达。结果发现INSL5多肽可诱导THP-1细胞向M2型巨噬细胞转化；同时通过巨噬细胞与肿瘤细胞共培养发现INSL5多肽刺激的巨噬细胞能够促进鼻咽癌细胞的侵袭能力。鼻咽癌细胞分泌的INSL5也可能通过旁分泌途径作用于EB病毒和巨噬细胞间接促进鼻咽癌的转移过程。 .综上说述，本研究通过对INSL5 研究，初步阐明了其在鼻咽癌中的作用及其机制，通过制备INSL5的中和性抗体，拟将INSL5-GPCR142作为鼻咽癌治疗的新靶点。