Bt杀虫晶体蛋白靶标受体基因克隆与功能分析

对Bt毒理与抗性机制的认识不足，正严重制约着Bt抗药性的治理和新型Bt杀虫蛋白的开发与应用，并威胁着转Bt基因作物的使用寿命。.　　本项目拟克隆Bt抗性和敏感小菜蛾钙粘蛋白、氨基肽酶、碱性磷酸酶和糖脂类4种可能的受体基因；制备4种受体基因的dsRNA并分别建立其RNA干扰技术体系；测定4种受体基因沉默后两小菜蛾品系对Bt杀虫蛋白的反应特性。构建抗性与敏感小菜蛾种群4种受体基因的表达载体及其高效表达体系；测定抗性与敏感小菜蛾4种表达受体蛋白单独和两两组合后与Cry1Ac蛋白的杂交与亲和特性。通过功能基因表达蛋白与杀虫蛋白的直接作用和基因沉默导致受体功能丧失正反两个方面，来阐明Bt杀虫蛋白的靶标受体和受体所导致的害虫抗药性，从而阐明Bt的分子毒理机制和抗性的分子机理。研究结果对Bt杀虫蛋白的开发与可持续应用具有重要的理论和实践意义。