HMG-Coa-Reductase基因的克隆,表达及表达产物的应用

我们将聚合酶链反应法制备的人HMG-CoA还原酶催化域cDNA克隆人原核表达载体pET30，使表达产物羧基端融合载体编码的His-Tag以利产物的稳定及完整产物的纯化。产物的纯化只需一步特异的His-Bind树脂亲合层析即可完成。纯化的产物在考马斯亮兰R-250染色的SDS-聚丙烯酰胺电泳胶上显示为一条带，经测算分子量与理论值相近。我们采用分光光度计法对纯化产物的催化活性进行了测定，并观察了目前临床上使用的HMG-CoA还原酶抑制剂类药物舒降脂（Simvastatin）对其活性的影响，实验结果显示反应速度随反应体系中表达产物含量的增加而加快，若在相应的反应体系中加入舒降脂则反应速度相对减慢。