南蛇藤配伍益母草对CIA滑膜细胞MAPK信号通路的影响

类风湿关节炎(RA)的基本病理特征是累及全身多关节的滑膜炎，最终导致软骨和关节破坏。滑膜细胞的肿瘤样增殖和炎性细胞的浸润是病变的中心环节，其中成纤维样滑膜细胞(FLS)是关节滑膜细胞中主要的效应细胞, 在RA的滑膜炎症及骨质破坏中起着重要作用。南蛇藤配伍益母草是临床常用抗RA经验药对，具有祛风湿、活血化瘀利水的明显疗效。本项目通过对南蛇藤配伍益母草有效活性物质的提取、筛选与分析，采用MTT比色法、双抗体夹心ELISA法、免疫组化法、Western-blot等多种方法，研究其对胶原诱导关节炎大鼠体外FLS增殖的作用,探讨其对MAPK细胞信号转导通路及下游信号转导元件的活化、促炎性细胞因子表达的影响，从信号转导通路角度阐明南蛇藤配伍益母草有效物质通过抑制MAPK信号转导通路元件的活化抑制FLS增殖、促炎细胞因子表达而发挥抗RA的药理机制，为RA的中药治疗提供实验依据。

背景：类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是一种以对称性多关节炎为主要临床表现的自身免疫性疾病，以关节滑膜慢性炎症、关节的进行性破坏为特征。前期研究发现，昆明山海棠（THH）配伍益母草治疗RA疗效确切，但其活性成分及其作用靶点尚未完全明确。.目的：本研究以THH配伍益母草为研究对象，以FLS的“肿瘤样”增殖为研究重点，从信号传导通路的角度阐明THH伍益母草治疗RA的价值，为中药药对配伍临床应用提供理论依据。.方法：本研究通过对THH配伍益母草活性物质的筛选与分析，采用ELISA、RT-PCR 、Western-blot等多种方法，研究对胶原诱导关节炎（CIA）大鼠的治疗作用及体外FLS增殖的作用，通过抑制MAPK信号转导通路元件的活化抑制FLS增殖、促炎细胞因子表达而发挥抗RA的药理机制。.结果：（1）THH中的化学成分主要是二萜、三萜和倍半萜类生物碱，其中雷公藤内酯醇（TP）是活性最高的环氧二萜内酯化合物，同时也是THH引起毒副作用的主要成分。.（2）TP和THH复方可不同程度的缓解CIA大鼠的关节炎症状，降低大鼠的TNF-α的表达，通过调节RANKL/OPG通路、经典Wnt信号通路，从而抑制破骨细胞的过度分化，促进成骨细胞的分化，提高骨密度和骨小梁数量，抑制骨破坏。.（3）昆母汤提取物可抑制RA-FLS细胞的增殖和TNF-α诱导的细胞炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、MMP-3以及NO、iNOS、COX-2、PGE2的表达，抑制TNF-α和TNFRII结合，从而抑制阻断TNF-α介导的细胞增殖，滑膜炎症的增生和骨破坏。.（4）昆母汤提取物能抑制TNF-α诱导的RA-FLS增殖；干预24h后，RA-FLS出现G1期及S期阻滞，并发生凋亡；可能通过降低bcl-2mRNA表达，提高bax及caspase-3mRNA表达，促进RA-FLS发生凋亡；G1期的阻滞可能与抑制cyclin D1mRNA表达有关；能抑制MAPK信号通路的ERK、JNK及P38蛋白激酶发生磷酸化。.结论：THH中的主要生物活性物质是TP；THH复方和TP可不同程度的缓解CIA大鼠的关节炎症状，并起到不同程度的抑制骨破坏作用；昆母汤提取物可抑制RA-FLS细胞的增殖和TNF-α诱导的细胞炎性因子的表达；并能抑制MAPK信号通路的ERK、JNK及P38蛋白激酶发生磷酸化