基于母胎界面免疫细胞交互作用网络研究针刺调控控制性超促排卵大鼠围着床期免疫耐受的分子机制

The low implantation rate during the controlled ovarian hyper-stimulation (COH) cycles is a pending bottleneck in assisted reproductive technology. The induction of immune tolerance around the maternal-fetal interface plays a crucial role in successful embryo implantation, whereas the interactive network of immune cells with dendritic cells (DC) as the core precisely controls every aspect of immune tolerance. Previous studies have shown that: acupuncture could improve the pregnancy rate of COH rats, regulate angiogenesis during the peri-implantation period, and regulate the number and function of DC. Based on the interaction of immune cells, especially DC in immune tolerance, this study combines in vivo and in vitro experiments. In vivo, the effect of acupuncture on Th1 /Th2 cytokines in peri-implantation endometrium , the numbers of DCs, regulatory T cells, subsets and differentiation and cytokines secreted by DCs and NKs is to be observed by using COH rat model. In vitro, the DC / NK cells and DC / NK / decidual cells co-culture systems are to be constructed and the effect of acupuncture on the cytokines in the two co-culture systems and the gene expression profiles of the co-cultured decidual cells is to be observed. To prove the hypothesis that "acupuncture can regulate the immunological tolerance by regulating the interaction network of immune cells, DCs as the core, in the interface of the maternal-fetal in COH rats" and provide the basis for the application of acupuncture in assisted reproduction.

控制性超促排卵（COH）周期中着床率低是辅助生殖技术悬而未决的瓶颈问题。围着床期母胎界面免疫耐受的诱导在胚胎着床中起着至关重要的作用，而以DC为核心的免疫细胞交互作用网络精准地调控着免疫耐受的每个环节。前期研究表明：针刺能提高COH大鼠的怀孕率，调控围着床期血管生成，且能调控DC的数量和功能。基于免疫细胞交互网络，尤其是DC在免疫耐受中的作用，本研究将体内和体外实验相结合，利用COH大鼠模型，体内观察针刺对围着床期子宫内膜Th1/Th2型细胞因子的影响，对DC、Treg的数量、亚群和分化以及DC、NK分泌的细胞因子等的影响；体外构建DC/NK和DC/NK/蜕膜细胞共培养体系，观察针刺对上述两种体系内细胞因子及共培养后蜕膜细胞分泌表达基因谱的影响。以期证明“针刺可通过调控母胎界面以树突状细胞为核心的免疫细胞交互网络从而调控COH大鼠围着床期免疫耐受”的假说，为针灸在辅助生殖的应用提供依据。

控制性超促排卵(COH)周期中着床率低是辅助生殖技术悬而未决的瓶颈问题。着床环节，子宫内膜容受性和母胎免疫耐受均在胚胎着床中起着至关重要的作用。而以DC为核心的免疫细胞交互作用网络精准地调控着免疫耐受的每个环节，因此，可以视DC为母胎界面免疫耐受的调控核心。它通过调控Th1/Th2 型细胞因子平衡，促进调节性T细胞的增殖，并与NK 细胞的相互作用，在调控免疫应答与耐受的平衡中发挥重要作用。 .本项目首先通过多种促排卵剂量(PMSG/HCG 的剂量分别为 10U/10 U、20 U /20 U、40 U /40 U 和 100 U /100 U)比较，确立了以 PMSG 20IU+HCG20IU 剂量组合作为构建大鼠促超排卵模型的最优剂量方案。.其次，通过观察针刺对 COH 大鼠围着床期(妊娠 D4、5 和6天)子宫内膜Th1 /Th2 细胞因子和 Treg/Th17 细胞因子水平的表达，结果表明模型组子宫内膜局部Th1 /Th2和Th17/Treg 细胞因子水平表达异常，而针刺可以改善围着床期子宫内膜 Th1 /Th2和Th17/Treg 细胞因子水，使子宫内膜趋于Th2和 Treg 优势主导，从而有利于着床。 .最后，通过观察COH 大鼠围着床期(妊娠 D4、5 和 6天) 子宫内膜容受性标志物胞饮突、子宫内膜细胞因子 LIF、integrin β、VEGF、FGF-2 的水平以及血清雌孕激素水平等指标，结果表明针刺改善 COH 大鼠围着床期子 宫内膜容受性，且其更深层次机制可能是通过使着床窗口趋于恢复正常而发挥作用。.本研究构建了成熟的 COH 大鼠模型，可为后续研究提供了参考依据。此外，这些研究结果解释了针刺通过参与调控免疫耐受和子宫内膜容受性进而有利于着床，为针灸在辅助生殖领域的应用提供一定的理论依据。