半夏泻心汤调节胃癌前病变“菌-炎-癌”致病途径的Treg/Th17免疫失衡的分子机制

“H.pylori infection-gastritis-atrophic-dysplasia-cancer” is the classic way of occurrence and development of gastric cancer. CagA+Hp infection plays a key role in this progress. It can give rise to the Th17/Treg cell imbalances,and then the immune microenvironment unstability.The co-existence of inflammatory response and immune toleranc in the gastric mucosa may be correspond to the pathogenesis of “Wei-Pi”,“Qing-Yang no rise”and“Zhuo-Yin no decline”. “Banxia Xiexin decoction” is raised by Zhong-Jing to adjust this imbalance of “Qing-Yang”and“Zhuo-Yin”. Confirmed in our previous study it could reduce the Hp virulence, protect gastric mucosa, reduce inflammation reaction and then retard PLGC pathological histology.But it still not clearly if it can balance the Th17/Treg cell in CagA+Hp infection gastric mucosa.This study will reasch the therapeutic mechanism of “Banxia Xiexin decoction” on Treg/Th17 imbalances in immune microenvironment of precancerous lesions of gastric by animal experiments on three levels.

“Hp感染-慢性胃炎-慢性萎缩性胃炎-胃癌前病变-胃癌”是胃癌发生发展的经典途径，而Hp感染致胃黏膜免疫微环境Treg/Th17高水平失衡，使Hp逃逸宿主免疫，胃黏膜慢性非可控炎症长期存在，是“菌-炎-癌”逐步发展的重要环节。而免疫耐受与炎症反应共同存在的黏膜免疫微环境状态与中医学“胃痞”之气机升降失常致清阳不升、浊阴不降的病机相吻合。半夏泻心汤具有辛开升清阳、苦降降浊阴的作用。既往我们证实其有减低Hp毒力、保护胃黏膜、减轻炎症反应从而延缓PLGC进程的作用，但其能否通过升清阳、降浊阴而达到调平Treg/Th17失衡，恢复胃黏膜免疫微环境稳态，进而阻断“菌-炎-癌”发病途径的效应并不清楚。本项目拟借助Hp感染小鼠模型，在行为学、形态学、分子生物学三个水平上，阐释PLGC病机关键之清阳不升、浊阴不降的气机升降失常物质基础及半夏泻心汤辛开苦降调节胃黏膜Treg/Th17平衡的部分机制。

“Hp感染-慢性胃炎-慢性萎缩性胃炎-胃癌前病变-胃癌”是胃癌发生发展的经典途径，而Hp感染致胃黏膜免疫微环境Treg/Th17高水平失衡，使Hp逃逸宿主免疫，胃黏膜慢性非可控炎症长期存在，是“菌-炎-癌”逐步发展的重要环节。与中医学“胃痞”之气机升降失常致清阳不升、浊阴不降的病机相吻合。项目借助Hp感染小鼠模型，在行为、形态、、分子生物学三个水平上，阐释PLGC病机关键之清阳不升、浊阴不降的气机升降失常物质基础及半夏泻心汤辛开苦降调节胃黏膜Treg/Th17平衡的部分机制。.本研究采用联合应用 H.pylori SS1 灌胃、MNNG 自由饮用、饥饱失常、烫热高盐饮食等方法进行CagA+Hp 感染小鼠PLGC 模型造模。将小鼠随机分为 6 组，包括正常组、模型组、四联杀菌组、半夏泻心汤全方组、辛开组和苦降组，每组各40只，每组分为 2 周、1 个月、2 个月、4 个月 4 个时相，每个时相每组各取 10 只小鼠分别用四联杀菌药、半夏泻心汤全方、辛开方（全方去黄连、黄芩）、苦降方（全方去清半夏、干姜）干预 Hp 感染小鼠模型，四联杀菌组给予四联杀菌药、半夏泻心汤全方组给予半夏泻心汤全方、辛开组给予辛开方、苦降组给予苦降方、正常组和模型组给予等量生理盐水。观察小鼠一般情况及病理组织学变化，进行Hp计数，流式细胞术检测Treg、Th17，PCR 检测FoxP3、RORγt基因表达，Western Blot检测FoxP3、RORγt 蛋白表达，ELISA检测 TGF-β、IL-10、IL-6、IL-17A、IL-22、CXC-9、CXC-10因子水平。.造模阶段，与正常组相比，小鼠出现形体消瘦，精神不振，皮毛无光泽，脱毛，迟钝，喜扎堆，活动量少，疲软无力，食欲差，大便不成形，肛门口欠清洁；药物干预阶段，半夏泻心汤组辛开、苦降、四联组小鼠体型较前增长，食欲及活动量增加，不如半夏泻心汤组明显，模型组小鼠较前无明显改善。.组织病理学半夏泻心汤及其拆方皆有调控作用，整方要好于拆方；流式细胞术检测Treg、Th17，PCR 检测辛开组、苦降组、四联组皆有一定的调控作用，但不如半夏泻心汤组明显；FoxP3、RORγt基因表达，Western Blot检测FoxP3、RORγt 蛋白表达，辛开组、苦降组、四联组皆有一定的调控作用，但不如半夏泻心汤组明显；ELISA检测 TGF-β、IL