抑制Kupffer细胞miR-155活性诱导肝移植免疫耐受

移植肝脏具有免疫耐受性的重要原因是肝脏内存在Kupffer细胞（KCs）等特异性免疫细胞。KCs在肝移植急性排斥反应（AcR）过程中扮演着即促进AcR，又诱导免疫耐受的双重角色，其机制与调控Th1/Th2免疫平衡密切相关。microRNA-155(miR-155)是最新发现的调控T细胞、B细胞及APC细胞功能的关键因子，其缺失可削弱Th1型反应及APC细胞抗原呈递功能，促进Th1/Th2免疫偏移，但目前相关研究尚未涉及器官移植领域。本项目选择体内最大的APC细胞群─KCs为靶细胞，以miR-155为切入点，分离KCs并建立肝移植AcR模型，采用miR-155模拟物、阻遏物及转基因等手段，增强或抑制该基因在体内外表达，探讨miR-155对APC细胞功能及T细胞增殖、功能的影响及其分子机制，阐明miR-155在诱导肝脏移植免疫耐受中的具体作用，完善和丰富KCs在肝脏移植免疫耐受形成中的作用。

本研究中，我们以KCs为靶细胞，利用miR-155 inhibitor和mimic，判断抑制和过表达miR-155对活化KCs抗原呈递功能，SOCS1/JAK/STAT炎症信号通路及其对T细胞增殖、凋亡的影响；并建立小鼠肝移植急性排斥反应模型，转染携带miR-155-shRNA的慢病毒，观察抑制KCs miR-155活性后对移植肝脏急性排斥反应程度的影响，得到以下结果和结论：.（1）miR-155 inhibitor和mimic能有效抑制和增强KCs中miR-155表达；抑制KCs中miR-155表达可下调其表面分子MHCⅡ，CD86和CD40的表达，减弱其抗原呈递功能，并影响SOCS1/JAK/STAT炎症通路，减少促炎细胞因子的分泌，还可抑制T淋巴细胞增殖，增加T淋巴细胞凋亡，其机制与KCs上调FasL表达有关；而增强KCs中miR-155表达则可上调其表面分子MHCⅡ，CD86和CD40的表达，增强其抗原呈递功能，并增加促炎细胞因子的分泌，还可增强T淋巴细胞增殖，抑制T淋巴细胞凋亡。.（2）采用“两袖套法”非动脉化的血管重建方法能成功建立BALB/c-C3H小鼠原位肝移植模型，而经门静脉高压注射向肝脏内导入miR-155-shRNA慢病毒，能实现供肝及KCs中miR-155基因的有效沉默。.（3）BALB/c-C3H小鼠原位肝移植模型为急性排斥反应模型，经门静脉转染miR-155-shRNA慢病毒抑制肝内及KCs中miR-155活性后，可明显改善移植肝脏病理及肝功能变化，并且通过上调Th2型典型细胞因子（IL-10）和下调Th1型典型细胞因子（IFN-γ）的基因和蛋白表达，从而实现Th1/Th2免疫偏移，有利于免疫耐受的诱导。