基于TLR2/TLR4探讨塞络通胶囊调节缺血性脑血管病小胶质细胞表型保护神经元的机制研究

Stroke is a common disease. The vast majority of stroke cases are ischemic cerebrovascular diseases caused by transient or permanent cerebrovascular occlusion. Microglia are specialized macrophages in the central nervous system. Phagocytosis is performed to remove pathogens or damaged neurons. There is increasing evidence that microglia activation is essential for attenuating neuronal apoptosis, enhancing neurogenesis, and promoting functional recovery after cerebral ischemia. Based on the stimulation of pro-inflammatory or anti-inflammatory cytokines, microglia can usually be polarized into pro-inflammatory phenotypes and anti-inflammatory phenotypes, promoting M2 phenotypic polarization helps promote tissue regeneration after injury, while specific Inhibition of TLR2 and TLR4 receptors in microglia, thereby promoting the polarization of microglia to M2 phenotype, may be one of the effective strategies for the effective treatment of ischemic stroke. Slotong Capsule (SLT) is a traditional Chinese medicine compound preparation for the treatment of vascular dementia developed by ginseng, ginkgo biloba and saffron. The purpose of this study is to explain the function of microglia by inhibiting microglia. The TLR2 and TLR4 receptors promote the polarization of microglia to the M2 phenotype, thereby achieving anti-inflammatory effects and exerting its protective effect on post-ischemic nerve damage.

脑卒中是一种常见的疾病，绝大多数脑卒中病例是由短暂性或永久性脑血管闭塞引起的缺血性脑血管病，小胶质细胞为特化的巨噬细胞，在中枢神经系统中进行吞噬作用，清除病原体或受损的神经元。小胶质细胞激活对于减轻神经细胞凋亡，增强神经发生至关重要，并能促进脑缺血后的功能恢复。基于促炎或抗炎细胞因子的刺激，小胶质细胞通常可以极化为促炎表型和抗炎表型，促进M2表型极化有助于促进损伤后的组织再生，而特异性的抑制小胶质细胞的TLR2和TLR4受体，从而促进小胶质细胞向M2表型极化，可能是有效治疗缺血性卒中的有效策略之一。塞络通胶囊（SLT）是本团队选用人参、银杏叶、西红花研发的治疗血管性痴呆的中药复方制剂，本课题以期从小胶质细胞的功能阐释SLT可能是通过抑制小胶质细胞的TLR2和TLR4受体，从而促进小胶质细胞向M2表型极化，进而达到抗炎目的，发挥其对缺血后神经损伤的保护作用。

脑卒中是一种常见的疾病，绝大多数脑卒中病例是由短暂性或永久性脑血管闭塞引起的缺血性脑血管病（缺血性卒中），最终导致脑梗死。从卒中发生的最初几分钟到几天、几周内，一系列复杂的级联反应导致脑内不可逆转的损伤，其主要阶段包括血流中断引起的能量衰竭、兴奋性氨基酸毒性、钙超载、氧化应激、血脑屏障（blood brain barrier，BBB）功能障碍、微血管损伤、相关炎症和免疫反应，进一步导致神经元、胶质细胞和内皮细胞的死亡。本课题以期从小胶质细胞的功能阐释SLT治疗缺血性脑卒中的作用机制，完善SLT药效学理论基础，为多成分、多靶点及多途径防治缺血性脑血管病的传统中药研发提供理论依据。.课题采用大鼠微球法至多发性脑梗死实验模型，通过神经行为评分、HE染色观察病理学形态评价SLT对皮层区损伤的保护作用；根据组织内及血清内炎性因子的表达，以及免疫荧光、免疫印迹观察小胶质细胞的活化、表型的变化及相关TLR4/MYD88/NF-кB信号通路的变化，进一步建立人小胶质细胞——HMC3细胞培养体系，通过CCK8法考察SLT对正常培养HMC3细胞活力的影响；随后，依据前期基础及参考文献建立HMC3细胞脂多糖（LPS）损伤模型，检测细胞分泌炎性因子含量变化，免疫荧光、蛋白免疫印迹观察小胶质细胞的活化、表型的变化及其相关的TLR4\MYD88\NF-кB信号通路的变化，考察小胶质细胞损伤后SLT对其的影响。.我们观察到如下结果：与模型组相比，SLT可显著降脑缺血大鼠神经行为评分的分值；SLT可有效减轻小胶质细胞的活化及增殖，调节小胶质细胞由促炎表型M1向抗炎M2表型转化；SLT可抑制缺血侧皮层区及血清内炎性因子及趋化因子的表达，根据免疫荧光与免疫印迹的结果看出，SLT可能通过抑制TLR4/MYD88/NF-кB信号通路的表达来调节小胶质细胞极化，进而抑制炎性反应；在细胞实验中，细胞水平结果与整体水平结果互相印证，SLT调节了LPS诱导的小胶质细胞极化，调节小胶质细胞由M1表型向M2表型转化，并抑制TLR4/MYD88/NF-кB信号通路的激活和炎性因子的生成，而TLR4的激活显著增强了这些效应；SLT下调了TLR4激动剂增强的这些效应。