联合应用Nifuroxazide与SAT05f对急性移植物抗宿主病的防治作用及机制研究

The occurrence of acute graft-versus-host disease (GVHD) is the major barrier to the broader use of allo-genetic hematopoietic stem cells transplantation. Currently there are no highly specific and efficient drugs for acute GVHD. Monotherapy is not sufficient for treatment of acute GVHD, and more efficient and safe therapeutic regimen are urgent need. Several studies demonstrated that Stat3 and TLR9 signal pathways are critical for T cell activation and APC maturation, and are important mediators of in acute GVHD. Specific block of these two critical signal pathways may be novel strategies for acute GVHD therapy. As an antibacterial drug, Nifuroxazide has been reported as the specific inhibitor of Stat3 recently, while as an inhibitory ODN, SAT05f has been proved capable of specific inhibiting TLR9 mediated immune responses. Thus, we will assess the effect of Nifuroxazide and SAT05f on acute GVHD and explore the mechanisms involved on three aspects: inflammatory cytokines, APC mature and T cell activation. This study will provide theoretic and experimental basis for prevention and treatment of acute GVHD.

急性移植物抗宿主病 (GVHD) 是阻碍临床异基因造血干细胞移植应用的主要因素。目前仍没有特异性高并且非常有效的防治药物，单一的干预手段无法有效防治GVHD，寻找对其更加有效的联合防治方案势在必行。研究发现，Stat3与TLR9的激活通过诱导T细胞活化和抗原提呈细胞 (APC) 成熟在急性GVHD的发生发展中均发挥着关键的作用，而联合应用这两个信号途径的特异性抑制剂防治GVHD目前尚未见报道。Nifuroxazide作为治疗胃肠道感染的药物，被证实能够直接抑制Stat3表达；SAT05f作为一种抑制性ODN，已被证明能抑制TLR9介导的免疫应答。鉴于此，本课题将研究联合应用Nifuroxazide及SAT05f对急性GVHD的防治作用，并从细胞因子产生、APC成熟和供者T细胞活化三个方面初步探讨其机制，为临床GVHD的药物防治提供直接的理论和实验依据。

急性移植物抗宿主病的发生是阻碍异基因造血干细胞移植成功的最大障碍，其发病机制是供者T细胞接受受者异基因抗原刺激后过度增殖所造成的严重病理免疫反应。研究发现，TLR9与Stat3的激活分别通过诱导抗原提呈细胞成熟和T细胞活化在急性GVHD的发生发展中发挥着非常关键的作用，可能是防治急性GVHD的关键靶点。.研究证实，硝呋齐特 (Nifuroxazide)能够特异性抑制骨髓瘤细胞中Stat3的磷酸化，进而抑制骨髓瘤细胞增殖，并且其毒性很小，不会损伤正常外周血单核细胞，因此在临床应用具有一定的安全性。另外，SAT05f已经被证实能够选择性抑制TLR9激活所介导的免疫反应，在治疗免疫反应过度激活导致的疾病方面具有良好的应用前景。. 因此，在本课题中，我们选择联合应用SAT05f与Stat3抑制剂——Nifuroxazide，观察其对急性GVHD的防治效果。.我们在建立小鼠常规造血干细胞移植急性GVHD模型后4天，小鼠被随机分为四组：：PBS组、nifuroxazide组、SAT05f组及联合组。记录小鼠的体重及生存率。同时，我们检测了移植和治疗后各组小鼠相关脏器中Stat3及TLR9等基因的表达，相关脏器的炎症反应，脾脏中中CD4+、CD8+T淋巴细胞及Treg细胞的表达，小鼠血清中IFNγ、TNFα及VEGF的含量。. 我们的结果显示，联合应用SAT05f与Nifuroxazide能够有效地抑制急性GVHD模型小鼠的死亡率，降低了小鼠肝脏及小肠中的炎症反应。随后，我们对其机制进行了初步探讨。我们发现，联合应用SAT05f与Nifuroxazide能够有效降低模型小鼠肝脏组织中stat3及TLR9的表达，有效地降低了小鼠脾脏中CD4+及CD8+T淋巴细胞的表达，将CD8的比率由模型组的26.1%降到了18.6%，CD4的比率由模型组的48.5%降到了30.1%，同时将Treg细胞的比率由1.5%提高到了6.32%。此外，我们还发现联合应用SAT05f与Nifuroxazide有效地降低了小鼠血清中TNFα及IFNγ的含量。. 该项目结果为临床上急性GVHD的治疗新策略提供了一定的理论及实验依据。