基于差异蛋白组学对生态病因“内外合邪”中“寒湿致病”的发病机制研究

本课题采用差异蛋白组学双向凝胶电泳和新型质谱分析技术，在人工模拟六淫致病中的寒湿因子单发、兼挟为患对肺气虚、脾阳虚大鼠的发病机制进行差异蛋白比较研究，结合中医"寒湿为阴邪，寒伤阳气，湿遏阳气"，"邪之所凑，其气必虚"的理论寻找不同内外病因下的特异性蛋白标志物，并对其进行分析鉴定。通过本研究为"非生物性致病因子-寒湿邪气"致病的生态病因学蛋白质库的建立奠定基础，为中医"寒湿致病"寻找物质基础，也为中医"内外合邪"的病因"从化现象"寻找特异性指标，从蛋白质水平探索生态病因中寒湿因子的发病物质基础，建立寒湿致病的微观化辨证标准，探讨寒湿生态因子发病机制，观察"生物性致病因子"在体内的变化和发病情况，阐明外感发病的机制与环节，从而寻找外感疾病最佳预防策略和方案。

本课题是在国家自然科学基金面上项目（2009-2011年）“生态医学思想下的中西医病因学比较研究”课题取得阶段性成果建立生态病因学理论基础上,对生态病因学理论的进一步实证研究。.本研究人工模拟寒环境因素对正常及肺气虚大鼠一般情况、肺组织形态的影响、肺组织蛋白组学差异分析；人工模拟外湿环境对正常及脾阳虚大鼠一般情况、脾淋巴细胞增殖能力、脾组织形态的影响、脾组织蛋白组学差异分析。.结果表明，模拟外寒环境因素对正常及肺气虚组大鼠的一般情况、肺组织形态、肺组织蛋白都有影响，对肺气虚组影响更为明显。成功地复制了内外合邪（肺气虚+寒邪）大鼠模型。课题通过对各组大鼠蛋白质谱进行差异分析，鉴定的65个差异蛋白点，20个上调，45个下调。利用PMF的方法鉴定了7个与肺气虚证可能相关的差异表达的蛋白质、10个与寒邪犯肺可能相关的差异表达的蛋白质。其中转胶蛋白、真核翻译起始因子与肺气虚证有相关性，而热休克蛋白70、血清蛋白前体、纤维蛋白原、苹果酸脱氢酶、柠檬酸合酶则和“内外合邪”大鼠（寒邪作用于肺气虚机体）可能有相关性。人工模拟外湿环境因素对正常及脾阳虚组大鼠的一般情况、脾淋巴细胞增殖能力、脾组织形态、脾组织蛋白都有影响，对脾阳虚组影响更为明显。鉴定差异蛋白质20种,脾阳虚时表达上调的有11个 ,表达下调的有6个。外湿刺激时表达上调的有11个,表达下调的有4个。外湿刺激脾阳虚体质时表达上调的有9个 ,表达下调的有5个。结蛋白、3-磷酸甘油醛脱氢酶载脂蛋白A-I、真核翻译起始因子5a-1、异质核核糖核蛋白A2／B1与脾阳虚证相关，其中结蛋白、3-磷酸甘油醛脱氢酶已初步被证实与脾阳虚证相关。载脂蛋白A-I、肌动蛋白相关蛋白2/3复合物亚基5、结合珠蛋白与湿邪致病有关。肌球蛋白调节轻链9是外湿环境下脾阳虚大鼠致病独有的生物因子。.本研究确证了中医外因、内因两因致病较单因致病的机体易感性,还进一步证实了个别蛋白质是肺气虚证、脾阳虚证相关的疾病特异性蛋白,外邪致病（寒邪、湿邪）的生物性因子。为研究寒邪伤肺、湿邪伤的蛋白质学致病机制提供了科学研究基础资料，同时为内外合邪动物模型提供了一定的实验研究依据,为中医病因学研究提供有力科学依据,为临床预防和治疗疾病开拓新的思路、寻找多元的方法。