二亚硝基哌嗪（DNP）上调HSP70-2诱导鼻咽细胞癌变的分子机制研究

热休克蛋白70-2（HSP70-2）异常表达在细胞癌变中起重要作用，本项目在已有二亚硝基哌嗪（DNP）诱导大鼠鼻咽癌HSP70-2异常高表达的基础上，①采用分子动态模拟技术预测DNP与Hsp70-2基因调控区结合的结构域。构建DNP结合域的表达载体和报告基因，分析结合域对DNP诱导HSP70-2基因表达的影响，核素示踪技术验证DNP与结合域的结合。②模拟DNP与HSP70-2蛋白的结合，获得HSP70-2蛋白结合域。构建蛋白结合域表达载体，验证DNP与结合域的结合，明确DNP与HSP70-2结合对HSP70-2蛋白稳定性的影响。③基因转染将HSP70-2不同片段的表达载体导入HSP70-2（-/-）细胞，明确HSP70-2表达对DNP诱导鼻咽细胞转化的作用。阐明DNP介导HSP70-2表达和增强HSP70-2稳定性参与鼻咽癌变的分子机制，为鼻咽癌的早期防治提供科学理论依据。

二亚硝基哌嗪（DNP）是鼻咽癌重要的致癌因子，对鼻咽组织表现出特异的组织亲和性。DNP不仅诱导鼻咽癌变，参与鼻咽癌的转移。新近研究发现HSP70-2（Heat shock protein 70-2）过表与肿瘤发生、发展和转移密切相关。本项目临床研究发现，鼻咽癌患者血清DNP水平远高于健康人群，且有转移鼻咽癌患者血清DNP浓度显著高于无转移者，血清DNP浓度与鼻咽癌转移呈正相关；鼻咽癌组织HSP70-2显著高表达，转移癌组织HSP70-2表达显著高于原发癌组织，HSP70-2过表与鼻咽癌转移有关。实验研究发现，DNP通过上调HSP70-2促进细胞增殖、细胞软琼脂集落形成，提示DNP通过HSP70-2诱导鼻咽细胞转化。 此外还发现DNP诱导鼻咽癌细胞(6-10B)侵袭转移，且伴HSP70-2高表达，表现出作用时间依赖性和作用浓度依赖性。 进一步研究发现DNP通过与Hsp70-2启动子HRE (hypoxia-responsive elements) 和HSE (heat shock elements)结合增强Hsp70-2转录而增强HSP70-2蛋白表达，其结合方式是非共价键式。HSP-70家族有多个成员，研究表明DNP仅诱导HSP70-2表达，而对其他成员没有作用。裸鼠实验证实DNP诱导6-10B细胞转移，转移癌组织呈现HSP70-2表达。siRNA-Hsp70-2阻断HSP70-2表达，DNP诱导细胞侵袭迁移的能力显著减弱。上述结果提示，DNP可能通过与Hsp70-2基因启动子HRE和HSE结合增强Hsp70-2基因转录，增强HSP70-2蛋白表达，增强鼻咽癌细胞侵袭移动能力，参与鼻咽癌转移。DNP诱导HSP70-2过表达可能是鼻咽癌高转移因素之一。DNP通过SHP70-2促进鼻咽细胞增殖、转化和鼻咽癌细胞侵袭转移。