S1P5表达在NK细胞调节GVHD与GVT中的作用及机制

Recently reported,S1P5 is very important chemokine receptor of NK cells that governs NK cell trafficking in steady-state situation and rapid mobilization in inflammatory conditions.The effect and mechanism of S1P5 on GVHD are unclear.Our preliminary results show that S1P5 expression downregulation of NK cells can cause occurrence of GVHD after allogeneice hematopoietic stem cell transplantation.In this project,to define relationship of S1P5 and GVHD or GVT,we intend to use gene transfer,RNA interference,animal transplant model, fluorescence imaging system for living animal and so on.The study includes the influence of S1P5 expression changes on proliferative capacity,phenotype,cytokines and other biological characteristics of NK cells in vivo and vitro;the effect and mechanism of NK cells with different S1P5 expression on mixed lymphocyte reaction (MLR),T cells and dendritic cells (DC) in vivo and vitro; the effect and mechanism S1P5 exprassion changes on NK cell trafficking,GVHD and GVT in vivo.The above studies contribute to further elucidating the mechanism of GVHD,hope to establish biological markers for GVHD warning or diagnosis,pvovide experimental data to balance GVHD and GVT,and also lay the fundation for the next step to explore therapeutic targets and development of new drugs.

S1P5是近年来发现的NK细胞非常重要的一个趋化因子受体，调节NK细胞体内分布的稳定及在病变部位的趣化，但对GVHD的影响及作用机制并不清楚。我们的初步结果显示，异基因造血干细胞移植后NK细胞S1P5表达下调易发生GVHD，本课题拟采用基因转染、RNA干涉、动物移植模型、荧光素体内成像系统等以明确S1P5与GVHD、GVT发生之间的关系及其相关机制。研究内容包括：体内、外S1P5表达变化对NK细胞增殖能力、表面表型、细胞因子等生物学特性的影响；体内、外S1P5表达不同的NK细胞对MLR、T细胞、DC细胞的作用与机制；体内NK细胞S1P5表达变化对其体内分布、GVHD、GVT的影响及相关机制。上述研究内容有助于深入阐明GVHD发生的机制，并希望建立GVHD预警或诊断的生物学标志，另外为平衡GVHD和GVT作用提供实验数据。通过该项研究还为下一步探索治疗靶点，开发新的药物打下基础。

S1PR5是近年来发现的NK细胞非常重要的一个趋化因子受体，调节NK细胞体内分布的稳定及在病变部位的趋化。而NK细胞在异基因造血干细胞移植中可以通过杀伤同种反应性活化的T细胞来抑制 GVHD 发生。本课题采用体内、体外实验研究S1PR5对NK生物学特性，GVHD以及GVT的影响，以阐明S1PR5调节GVHD的作用机制。目前已基本完成相关实验。我们利用CRISPR / Cas9技术，建立了稳定的S1PR5沉默（S1PR5-/-）小鼠模型，体外实验显示敲除S1PR5不影响NK细胞的增殖活性、 细胞毒作用及细胞因子分泌作用；体内实验显示S1PR5 表达缺失影响小鼠部分组织器官中 NK 细胞的分布。为了进一步研究作用机制，我们建立了aGVHD小鼠模型，观察到在MHC不相合小鼠造血干细胞移植模型中，S1PR5表达缺失加重了aGVHD 发生，降低小鼠的生存率；S1PR5表达缺失的NK细胞被阻滞在骨髓，使得GVHD靶器官NK细胞减少，对异源活化性 T 细胞抑制作用及促进Treg细胞增殖作用减弱。通过活体成像技术，我们发现NK细胞S1PR5表达缺失并不影响T细胞的GVT效应。以上结果部分阐明了S1PR5表达在NK细胞调节GVHD的作用及机制，为开发免疫调节的靶向药物打下基础，提高异基因造血干细胞移植的成功率奠定基础。本课题发表核心期刊论文2篇，SCI论文8篇，Medline论文18篇，培养博士生7人，硕士生3人。